Question

6．P5CS是植物合成脯氨酸的關鍵酶，脯氨酸有助于植物抵御干旱．下圖是將P5CS基因轉入煙草細胞獲得耐旱煙草植株過程的示意圖．

請回答：
（1）要將P5CS基因成功插入Ti質粒中，Ti質粒的T-DNA中應含有HindⅢ、SalⅠ限制酶切割位點．
（2）檢測P5CS基因是否整合到煙草細胞染色體DNA上，采用DNA分子雜交技術，轉基因是否成功可以直接在個體水平上對轉基因植物與非轉基因植物的抗旱/耐旱性能進行比較．
（3）將轉入P5CS基因的煙草細胞培育成完整的植株需要用植物組織培養技術，愈傷組織通過再分化發育成完整植株，此過程除營養物質外還必須向培養基中添加植物激素（生長素和細胞分裂素）．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是將P5CS基因轉入煙草細胞獲得耐旱煙草植株過程的示意圖，其中①表示基因表達載體的構建過程；②表示將目的基因導入農桿菌細胞；③表示目的基因隨著農桿菌的增殖而擴增；④表示脫分化過程；⑤表示再分化過程；⑥⑦表示個體發育過程．

解答 解：（1）由圖可知，目的基因前有HindⅢ限制酶切割位點，后有SalⅠ限制酶切割位點，因此要將P5CS基因成功插入Ti質粒中，Ti質粒的T-DNA中應含有HindⅢ、SalⅠ限制酶切割位點．
（2）檢測目的基因是否整合到煙草細胞染色體DNA上，采用DNA分子雜交技術；轉基因是否成功可以直接在個體水平上對轉基因植物與非轉基因植物的抗旱（或耐旱）性能進行比較．
（3）將轉基因煙草細胞培育成完整的植株還需采用植物組織培養技術，該技術包括脫分化和再分化兩個重要的步驟，即轉基因煙草細胞首先經過脫分化過程形成愈傷組織，愈傷組織再經過再分化發育成完整植株；決定脫分化和再分化的關鍵因素是植物激素的種類和比例，尤其是生長素和細胞分裂素．
故答案為：
（1）T-DNA
（2）DNA分子雜交    抗旱/耐旱
（3）植物組織培養　   植物激素（生長素和細胞分裂素）

點評 本題結合將P5CS基因轉入煙草細胞獲得耐旱煙草植株過程的示意圖，考查基因工程和細胞工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟；識記植物組織培養的過程及相關應用，能正確分析題圖，并能從中提取有效信息準確答題．