Question

3．小鼠的線粒體融合蛋白2基因（Mfn2）參與細胞周數調控．為研究該基因對卵母細胞體外成熟過程的影響，科研人員通過如圖過程獲得三組小鼠卵母細胞，培養一段時間后，檢測各組Mfn2的表達量，并統計第一極體的排出率以判斷卵母細胞的成熟情況．其中，將Mfn2基因與帶有熒光蛋白基因（Venus）的載體重組，表達出的融合蛋白帶有熒光，可以借此追蹤Mfn2的表達．請據圖回答問題．

（1）過程①表示逆轉錄．
（2）過程②表示在多種cDNA中定向擴增Mfn2，需要利用PCR技術．設計引物時，除了要保證引物與Mfn2互補外，還應在引物的序列中添加NheⅠ和HindⅢ（填圖中限制酶名稱）的酶切位點，以便對擴增產物進行雙酶切處理．
（3）設置第2組進行對照的目的是排除載體質粒轉錄產物對實驗結果的影響．
（4）檢測發：與第1組和第2組相比，第3組細胞中Mfn2的相對表達量明顯增多，且第一極體排出率低，這一結果表明Mfn2的表達增多對卵母細胞體外成熟過程具有抑制作用．

Answer 1

分析 分析圖形：圖中①表示RNA逆轉錄形成cDNA的過程，需要逆轉錄酶；②表示表示在多種cDNA中定向擴增Mfn2，需要PCR技術；然后將目的基因轉錄產物注入導入小鼠的卵母細胞，在適宜的條件下培養．

解答 解：（1）圖中①表示RNA逆轉錄形成cDNA的過程．
（2）②表示表示在多種cDNA中定向擴增Mfn2，需要PCR技術．根據圖中質粒中三個限制酶的切點，其中有一個在標記基因上，所以在PCR技術中，應在引物的序列中添加NheⅠ和HindⅢ的酶切位點，以便對擴增產物進行雙酶切處理．
（3）設置第2組對照實驗的目的是為了排除載體質粒轉錄產物對實驗結果的影響．
（4）檢測發：與第1組和第2組相比，第3組細胞中Mfn2的相對表達量明顯增多，且第一極體排出率低，說明Mfn2的表達增多對卵母細胞體外成熟過程具有抑制作用．
故答案為：
（1）逆轉錄
（2）PCR   NheⅠ和HindⅢ
（3）排除載體質粒轉錄產物對實驗結果的影響
（4）抑制

點評 本題以基因治療的流程圖為載體，考查了基因工程、細胞工程以及胚胎工程等方面的知識，難度適中．考生要能夠識記細胞核移植的過程；識記囊胚包括內細胞團和滋養層兩部分；明確基因工程中質粒和目的基因需要利用同種限制酶進行切割；掌握目的基因檢測和鑒定的一般方法等．