Question

2009年10月，我國自主研發的轉基因抗蟲水稻“華恢1號”獲得農業部頒發的安全證書。下圖表示該抗蟲水稻主要培育流程，據圖回答：

（1）④過程應用的主要生物技術是                    。
（2）殺蟲基因（crylA）是人們根據幾種Bt毒蛋白的分子結構，設計并人工合成的，這屬于                    工程技術范疇。
（3）組建理想的載體需要對天然的質粒進行改造。下圖是天然土壤農桿菌Ti質粒結構示意圖（示部分基因及部分限制性內切酶作用位點），據圖分析：

①人工改造時，要使抗蟲基因表達，還應插入                            。
②人工改造時用限制酶Ⅱ處理，其目的是：第一，去除質粒上的         和         （基因），保證T-DNA進入水稻細胞后不會引起細胞的無限分裂和生長；第二，使質粒帶有單一限制酶作用位點，有利于                                       。第三，使質粒大小合適，可以提高轉化效率等。
③若用限制酶Ⅰ分別切割改造過的理想質粒和帶有抗蟲基因的DNA分子，并構成重組Ti質粒。分別以含四環素和卡那霉素的培養基培養已成功導入抗蟲基因的水稻胚細胞，觀察到的細胞生長的現象是                                                       。
（4）若限制酶Ⅱ切割DNA分子后形成的粘性末端為，則該酶識別的核苷酸序列是                               。

Answer 1

（1）植物組織培養
（2）蛋白質
（3）①啟動子
②tms和tmr（2分） 目的基因（或外源DNA）準確插入
③在含卡那霉素的培養基能夠生長，而在含四環素的培養基中不能生長2分
（4）GACGTC

解析試題分析：如圖導入目的基因的受體細胞培養成植株需要用到植物組織培養技術。生產出自然界沒有的蛋白質屬于蛋白質工程，基因表達載體一般由目的基因，標記基因，啟動子、終止子等部分組成。如圖tms和tmr是控制生長素和細胞分裂素的基因所以應去除。為了目的基因的準確插入應使質粒帶有單一限制酶作用位點。改造后的質粒沒有抗四環素的標記基因所以以含四環素和卡那霉素的培養基培養后，在含卡那霉素的培養基能夠生長，而在含四環素的培養基中不能生長。根據黏性末端的堿基可推測該酶識別的核苷酸序列為GACGTC。
考點：基因工程
點評：本題考查了學生的識圖分析能力，難度適中，解題的關鍵是明確基因工程的過程。