Question

【題目】在白酒發酵的窖池中，當培養液的pH≤4.5時，酵母菌的代謝活動逐漸受到抑制，甚至停止。耐酸性酵母菌能在pH≤3.5的環境下繼續表現出較強發酵能力，適宜作白酒發酵生產用菌種，為選育適合白酒生產的耐酸性強的酵母菌，研究者進行了相關實驗，請回答下列有關問題：

（1）在發酵過程中，窖池中培養液的pH會逐漸下降，原因是_________________________。

（2）取窖底泥，溶于10mL無菌水中，再取1mL 上清液接入一定量的麥芽汁培養基中培養，其目的是_____________________，2天后分別接種到不同酸堿度的麥芽汁培養基上，培養結果見下表。為選擇合適的菌種，根據培養結果，可從表格中pH范圍為_________的培養基中獲得菌種。注：“+”越多表示菌體長得越好

pH=5	pH=4	pH=3	pH=2.5	pH=2
+++++	++++	+++	++	+

（3）通過圖示_____________法進行純化培養，取最終的酵母菌稀釋液0.1mL滴在培養基上進行涂布，要將涂布器___________后才能進行操作。在恒溫培養箱中培養一段時間后，其中某組的3個平板上菌落數分別為99個、92個、94個，則可以推測酵母菌液中每毫升含菌數為_____個。運用這種方法統計的結果往往較實際值偏小，原因是_____________。

（4）實驗獲得了三個耐酸性較強的酵母菌菌株，特點如下表。

菌株	A	B	C
特點	pH≤3.5時，生長代謝正常、優于其它常規菌種	pH≤3.5時，生長代謝正常，pH4～6時不正常	pH2.5～6，生長代謝正常、優于其它常規菌種

依據菌株特點，研究者認為________菌株更適合作為白酒發酵菌株，作出這一判斷的理由是____________________________________________________。

Answer 1

【答案】 細胞呼吸產生CO2，可形成碳酸，代謝過程還產生了其他酸性物質 使得酵母菌大量繁殖 2-3 稀釋涂布平板法 灼燒冷卻 9.5×108 有的菌落可能是由2個或多個菌體形成的 C 該菌對pH的耐受范圍更大，發酵初期pH近中性，C菌種適合此環境，更易于形成優勢菌群；發酵后期pH逐漸降低，C菌種依然能正常生長

【解析】【試題分析】

本題以選育適合白酒生產的耐酸性強的酵母菌為題材，考查微生物的分離與計數的相關知識。意在考查考生對微生物的實驗室培養和應用知識的掌握情況，以及實驗分析能力。考生要能從題目中提取有用的信息，再結合題意，梳理和回顧相關知識，對各小題進行解答。對第（2）小題的表格分析可知，實驗的自變量是pH，因變量是菌體的生長情況：隨著pH的降低，菌種生長得越來越差。根據第（3）小題的圖解應該能判斷出酵母菌液被稀釋了106倍，據此答題。

（1）在發酵過程中，窖池中培養液的pH會逐漸下降的原因是：酵母菌細胞呼吸產生CO2，可形成碳酸，代謝過程還產生了其他酸性物質。

（2）取窖底泥，溶于10mL無菌水中，再取1mL 上清液接入一定量的麥芽汁培養基中培養，其目的是使得酵母菌大量繁殖；耐酸性酵母菌能在pH≤3.5的環境下繼續表現出較強發酵能力，適宜作白酒發酵生產用菌種，所以根據培養結果，可從表格中pH范圍為2-3的培養基中獲得菌種。

（3）圖示純化培養的方法為稀釋涂布平板法；在培養基上進行涂布時，要將涂布器灼燒冷卻后才能進行操作；根據圖解可知菌液被稀釋了106倍（M），該稀釋度下平板上生長的平均菌落數C＝(99＋92＋94)÷3＝95個，涂布平板時所用的稀釋液的體積V＝0.1mL，根據公式可知，酵母菌液中每毫升含菌數為(C÷V)×M＝(95÷0.1)×106＝9.5×108個；由于有的菌落可能是由2個或多個菌體形成的，所以運用這種方法統計的結果往往較實際值偏小。

（4）根據表格分析可知，C菌對pH的耐受范圍更大，發酵初期pH近中性，C菌種適合此環境，更易于形成優勢菌群；發酵后期pH逐漸降低，C菌種依然能正常生長，所以C菌株更適合作為白酒發酵菌株。