Question

【題目】產脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產脂肪酶酵母菌株，科研人員開展了相關研究。請回答下列問題：

（1）常規微生物實驗中，下列物品及其滅菌方法錯誤的是__________（填編號）。

編號	①	②	③	④
物品	培養基	接種環	培養皿	涂布器
滅菌方法	高壓蒸汽	火焰灼燒	干熱	臭氧

（2）稱取1．0g某土壤樣品，轉入99mL無菌水中，制備成菌懸液，經__________后，獲得細胞密度不同的菌懸液。分別取0．1mL菌懸液涂布在固體培養基上，其中10倍稀釋的菌懸液培養后平均長出了46個酵母菌落，則該樣本中每克土壤約含酵母菌__________個。

（3）為了進一步提高酵母菌產酶能力，對分離所得的菌株，采用射線輻照進行__________育種。將輻照處理后的酵母菌涂布在以__________為唯一碳源的固體培養基上，培養一段時間后，按照菌落直徑大小進行初篩，選擇直徑__________的菌落，純化后獲得A、B兩突變菌株。

（4）在處理含油廢水的同時，可獲得單細胞蛋白，實現污染物資源化。為評價A、B兩菌株的相關性能，進行了培養研究，結果如圖。據圖分析，應選擇菌株__________進行后續相關研究，理由是__________。

Answer 1

【答案】④ 梯度稀釋 4．6×105（或460000） 誘變 脂肪（或油脂） 較大 B 該菌株增殖速度快，單細胞蛋白產量高；降解脂肪能力強，凈化效果好

【解析】

滅菌指用強烈的物理或化學方法殺滅所有微生物，包括致病的和非致病的，以及細菌的芽胞．常用滅菌方法：灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌法。高壓蒸汽滅菌適用于對一般培養基和玻璃器皿的滅菌，干熱滅菌適用于空玻璃器皿的滅菌，微生物接種時的金屬接種工具和試管口可以用灼燒滅菌。稀釋平板計數是根據微生物在固體培養基上所形成的單個菌落，即是由一個單細胞繁殖而成這一培養特征設計的計數方法，即一個菌落代表一個單細胞。將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋程度的菌液分別涂布到固體培養基的表面，使其均勻分布于平板中的培養基內，經培養后，由單個細胞生長繁殖形成菌落，統計菌落數目，即可計算出樣品中的含菌數。

（1）培養基一般進行高壓蒸汽滅菌，接種環可用火焰灼燒滅菌，培養皿一般通過干熱滅菌，涂布器應該用酒精引燃滅菌；故①②③正確，錯誤的是④。

（2）稀釋涂布平板法是將樣品進行一系列梯度稀釋后，獲得細胞密度不同的菌懸液，然后涂布到平板上。根據題意，1.0g土壤樣品轉入99mL無菌水中，制備成菌懸液，經系列梯度稀釋后，分別取0.1mL菌懸液涂布在固體培養基上，則稀釋的倍數為1000倍，其中10倍稀釋的菌懸液培養后長出了46個酵母菌落，則總的稀釋倍數為10000倍，故每克土壤中含酵母菌數為46×10000=4.6×105個。

（3）根據題意，欲提高酵母菌產酶能力，可對分離得到的產脂肪酶酵母菌菌株進行射線輻射，該育種方式為誘變育種。為了能篩選出符合要求的產脂肪酶酵母菌突變株，可配制以脂肪為唯一碳源的培養基，將輻射處理的酵母菌涂布在該固體培養基上，形成單菌落；產脂肪酶能力越強的酵母菌，分解利用脂肪的能力越強，菌落生長越好，一段時間后，按照菌落直徑大小進行初篩，選取直徑較大的菌落即可。

（4）據題圖分析可知，相同時間內，菌株B的細胞密度高于菌株A，而菌株B的脂肪剩余量低于菌株A的脂肪剩余量，故進行相關研究可選擇菌株B，原因是菌株B增殖速度快，單細胞蛋白的產量也高，同時降解脂肪的能力強，凈化效果更好。