Question

【題目】請(qǐng)回答基因工程相關(guān)問題：

（1）限制酶切割DNA分子時(shí)，斷裂的是___________鍵為了保證目的基因與載體的正確連接，通常用兩種_________________________________不同的限制酶同時(shí)處理含目的基因的DNA片段與載體

（2）若要通過(guò)反轉(zhuǎn)錄得到胰島素基因，可從人體的___________細(xì)胞中提取mRNA提取mRNA時(shí)，在提取液中一般要加入RNA酶抑制劑，其目的是______________________若要在體外得到大量胰島素基因，可采用______________________技術(shù)，該技術(shù)過(guò)程中設(shè)計(jì)引物時(shí)______________________（填“需要”或“不需要”）知道胰島素基因的全部序列

（3）將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)，大腸桿菌本身___________（填“含有”或“不含有”）質(zhì)粒一般情況下不能用未經(jīng)處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，原因是______________________。

Answer 1

【答案】磷酸二酯 識(shí)別序列和切割位點(diǎn) 胰島B 防止mRNA（RNA）被降解 PCR 不需要 不含有 未經(jīng)處理的大腸桿菌吸收外源DNA的能力較弱

【解析】

1、限制酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂。

2、PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。PCR技術(shù)的原理是DNA復(fù)制，需要的條件有：模板DNA（目的基因所在的DNA片段）、原料（四種脫氧核苷酸）、一對(duì)引物（單鏈的脫氧核苷酸序列）、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）。

（1）根據(jù)限制酶的作用可知，限制酶切割DNA分子時(shí)，斷裂的是磷酸二酯鍵由于同種限制酶切割得到的目的基因或質(zhì)粒的兩端黏性末端相同，會(huì)出現(xiàn)自體相連的現(xiàn)象，所以為了保證目的基因與載體的正確連接，通常用兩種識(shí)別序列和切割位點(diǎn)不同的限制酶同時(shí)處理含目的基因的DNA片段與載體

（2）由于胰島素基因只在胰島B細(xì)胞中表達(dá)，所以若要通過(guò)反轉(zhuǎn)錄得到胰島素基因，可從人體的胰島B細(xì)胞中提取mRNA提取mRNA時(shí)，在提取液中一般要加入RNA酶抑制劑，其目的是防止mRNA（RNA）被降解。可采用PCR技術(shù)在體外擴(kuò)增目的基因。在利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，只需要一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物，而不需要知道胰島素基因的全部序列

（3）質(zhì)粒上的抗性基因一般用作標(biāo)記基因，為了便于篩選導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，在將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)，所選的大腸桿菌本身一般不含有質(zhì)粒若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，原因是未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒（外源DNA）的能力極弱，常用Ca2+處理使之成為易于吸收外源DNA的感受態(tài)細(xì)胞。