Question

如圖1表示“華恢1號”抗蟲水稻主要培育流程，據圖回答：

（1）殺蟲基因通過①～④，最終在宿主細胞內維持穩定和表達的過程叫做

 

．
（2）組建理想的載體需要對天然的質粒進行改造．圖2是天然土壤農桿菌Ti質粒結構示意圖（示部分基因及部分限制酶作用位點），據圖分析人工改造質粒時：
①要使抗蟲基因能成功表達，還應插入

 

、

 

．
②用限制酶Ⅰ處理，其目的是：去除質粒上的

 

和

 

（基因），保證T-DNA進入水稻細胞后不會促進細胞的分裂和生長；
③若用限制酶Ⅱ分別切割經過②過程改造的理想質粒和帶有抗蟲基因的DNA分子，并構成重組Ti質粒．分別以含四環素和卡那霉素的培養基培養已成功導入抗蟲基因的水稻胚細胞，觀察到的細胞生長的情況是

 

．
（3）若限制酶Ⅱ切割DNA分子后形成的黏性末端為，則該酶識別的核苷酸序列是

 

．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術

專題：

分析：1、圖1所示，①時基因表達載體的構建，②將目的基因導入受體細胞，③用農桿菌侵染水稻胚細胞，④植物組織培養．圖2是基因表達載體，其組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因．標記基因可以篩選出含有目的基因的細胞．
2、“分子手術刀”--限制性核酸內切酶（限制酶）（1）來源：主要是從原核生物中分離純化出來的．
（2）功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性．
（3）結果：經限制酶切割產生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端．

解答： 解：（1）殺蟲基因通過①～④，轉化是指將目的基因導入受體細胞中，最終在宿主細胞內維持穩定和表達的過程．
（2）①基因表達載體組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因，要使抗蟲基因能成功表達，還應插入啟動子、終止子．
②tms的編碼產物控制合成吲哚乙酸和tmr的編碼產物控制合成細胞分裂素．因此用限制酶I處理tms和tmr基因，可以保證T-DNA進入水稻細胞后不會促進細胞的分裂和生長．
③若用限制酶Ⅱ分別切割經過②過程，破壞了四環素抗性基因，受體細胞不具有抗四環素功能，但可以抗卡那霉素．分別以含四環素和卡那霉素的培養基培養已成功導入抗蟲基因的水稻胚細胞，觀察到的細胞在含卡那霉素的培養基中能夠生長，而在含四環素的培養基中不能生長．
（3）根據堿基互補配對原則，可以將限制酶Ⅱ切割DNA分子后形成的黏性末端配對完整，形成DNA鏈為

GACGTC

CTGCAG

，則該酶識別的核苷酸序列是GACGTC．
故答案為：
（1）轉化
（2）①啟動子、終止子　②tms、tmr
③在含卡那霉素的培養基中能夠生長，而在含四環素的培養基中不能生長
（3）GACGTC

點評：本題考查了基因工程的原理及技術的相關知識，意在考查考生能理解所學知識的要點，把握知識間的內在聯系；理論聯系實際，綜合運用所學知識解決自然界和社會生活中的一些生物學問題的能力和從題目所給的圖形中獲取有效信息的能力．