Question

8．為了得到普洱茶中產蛋白酶的微生物，研究人員進行了一系列篩選、檢測．
（1）研究人員稱取普洱茶1g，加入99mL無菌水，制備稀釋10²倍的茶葉水．再將茶葉水進行梯度稀釋，獲得A103、10⁴、10⁵倍的稀釋茶葉水．取100μL稀釋茶葉水，用（稀釋）涂布法接種到奶粉培養基，37℃條件下培養4-5天，在培養基中選擇菌落周圍的透明圈（或“水解圈”）較大的菌株作為目的菌株．
（2）將獲得的多個目的菌株接種于液體茶湯培養基中培養．已知氨基酸都能夠和茚三酮反應生成藍紫色物質，因此可以利用分光光度計測定茶湯中游離氨基酸的量．先用已知濃度的氨基酸溶液測定結果繪制標準曲線，再分別測定培養每個菌株的液體茶湯培養基的吸光值，與標準曲線比較，計算出該茶湯中游離氨基酸的量，氨基酸含量高的，即為蛋白酶產生量高的菌株．該實驗中應測定不接種（或“接種滅活菌株”）的液體茶湯培養基的游離氨基酸含量，作為對照組的數據．

Answer 1

分析 微生物常見的接種的方法：
①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落．

解答 解：（1）在稀釋涂布平板法中，首先對溶液進行梯度稀釋，即稱取普洱茶1g，加入99mL無菌水，可制備稀釋10²倍的茶葉水．再將茶葉水進行梯度稀釋，獲得A10³、10⁴、10⁵倍的稀釋茶葉水．取100μL稀釋茶葉水，用（稀釋）涂布法接種到奶粉培養基，37℃條件下培養4-5天，由于該茶葉中含有能夠產生蛋白酶的微生物，因此在培養基中選擇菌落周圍的透明圈（或“水解圈”）較大的菌株作為目的菌株．
（2）已知氨基酸都能夠和茚三酮反應生成藍紫色物質，因此可以利用分光光度計測定茶湯中游離氨基酸的量．先用已知濃度的氨基酸溶液測定結果繪制標準曲線，再分別測定培養每個菌株的液體茶湯培養基的吸光值，與標準曲線比較，計算出該茶湯中游離氨基酸的量，氨基酸含量高的，即為蛋白酶產生量高的菌株．該實驗中應測定不接種（或“接種滅活菌株”）的液體茶湯培養基的游離氨基酸含量，作為對照組的數據．
故答案為：
（1）99mL無菌水（稀釋）涂布透明圈（或“水解圈”）
（2）已知濃度的氨基酸溶液測定結果蛋白酶產生量高不接種（或“接種滅活菌株”）

點評 本題考查了微生物分離與純化的有關知識，要求考生能夠掌握微生物常見接種的方法，能夠根據題干信息篩選產蛋白酶高的微生物，再結合所學知識準確答題．