Question

(12分) 利用轉基因山羊乳腺反應器可生產人促紅細胞生成素(EPO)，獲得轉基因山羊的過程如下圖。請據圖回答下列問題：

（1）在已知EPO基因的上游和下游堿基序列的前提下，過程①獲取目的基因的方法為 。

（2）在過程②中，應用 切割目的基因和質粒，使其具有相同的黏性末端。EPO基因表達載體上要具備 等調控元件，以便完成EPO基因的轉錄。

（3）在過程③中，用 法將EPO表達載體移入雄原核中。在過程⑤前，需對囊胚期的細胞進行鑒定：一是用 法鑒定EPO基因表達產物；二是用 法鑒定囊胚的性別，選用雌性胚胎。

（4）為獲得更多轉基因山羊，一方面可對供體母山羊注射 促進超數排卵。另一方面，可對早期胚胎進行分割移植，胚胎分割的關鍵是 。

Answer 1

（除注明外，每空1分，共12分）

（1）PCR擴增（2分） （2）同一種限制酶 啟動子和終止子（2分）

（3）顯微注射法 抗原-抗體雜交（2分） DNA分析（2分）

（4）促性腺激素 將內細胞團均分

【解析】

試題分析：（1）依題意，可以依據已知EPO基因的上游和下游堿基序列合成引物，進而利用PCR技術擴增目的基因。

（2）過程②為基因表達載體的構建。在構建基因表達載體時，應使用同一種限制酶切割目的基因和質粒，使其具有相同的黏性末端。啟動子位于基因的首端，它是RNA聚合酶識別和結合的部位，終止子是轉錄終止的信號，所以EPO基因表達載體上要具備啟動子和終止子等調控元件，以便完成EPO基因的轉錄。

（3）過程③是將目的基因導入動物細胞的過程，該過程常采用顯微注射法。EPO基因表達產物的化學本質是蛋白質，鑒定目的基因是否翻譯成蛋白質，用抗原-抗體雜交技術；囊胚期的滋養層細胞將來發育成胎膜和胎盤，對胎兒的發育沒有多大影響，而且與將來發育成胎兒各種組織的內細胞團都來自同一個受精卵，基因型是相同的，因此鑒定囊胚的性別，應取滋養層做DNA分析性別鑒定。

（4）做超數排卵處理，應對供體母山羊注射促性腺激素；對早期胚胎進行分割時，要注意將內細胞團均等分割。

考點：本題考查基因工程、胚胎移植、胚胎分割的相關知識，意在考查學生能理解所學知識的要點，把握知識間的內在聯系，形成知識網絡結構的能力。