Question

2．胰島B細胞移植是一種有效治療糖尿病的方法．利用小鼠再生胰腺提取物（RPE）可定向誘導人羊膜間充質干細胞（hAMSCs）分化成胰島B細胞．請回答下列問題：

（1）取人羊膜組織刮除血塊、上皮細胞，沖洗后剪碎，然后用胰蛋白酶處理，去除細胞表面（糖）蛋白，使細胞分散開，最終制成hAMSCs懸液．將細胞懸液放入培養瓶中進行原代培養，先后出現細胞貼壁生長、接觸抑制現象象，直至細胞停止分裂增殖，這時需要將細胞進行相關處理，然后進行傳代培養．
（2）取傳至第3代的hAMSCs放入細胞培養板，同時加入RPE進行誘導分化培養．該代hAMSCs能保持細胞正常的（二倍體）核型．誘導分化培養15天后，提取細胞的RNA（或mRNA），用胰島素基因探針進行分子雜交，可初步檢測hAMSCs是否分化成胰島B細胞．
（3）用人的雜交瘤細胞來生產人源單克隆抗體難以成功，因此單克隆抗體大都來自鼠源．但鼠源單抗在人體內使用，會產生較強的免疫原性，為解決這一問題，發明了嵌合抗體．大致過程如圖所示，嵌合抗體能降低鼠源抗體的免疫原性，從圖中可以推測，免疫原性的產生主要與抗體的C（選填“V區”、“C區”）有關．構建的人鼠嵌合抗體基因表達載體除了標記基因和目的基因外，還有啟動子、終止子．
（4）科學家們用細胞融合實驗證明，分化的細胞中存在“閑置不用”的結構基因．他們把大鼠肝腫瘤細胞和小鼠成纖維細胞融合成雜交瘤細胞，篩選出含有兩套肝細胞染色體和一套成纖維細胞染色體的細胞．這些細胞既保持了合成大鼠肝細胞3種特異蛋白的能力，也合成了小鼠干細胞的這3種蛋白，但是在正常的小鼠成纖維細胞中從不合成這些．由此可見，融合實驗證明了小鼠成纖維細胞含有不表達的但肝細胞專一表達的基因，在特定條件下這些“閑置基因”也可表達．

Answer 1

分析 1、蛋白質工程指以蛋白質的結構規律及其與生物功能的關系作為基礎，通過基因修飾或基因合成，對現有蛋白質進行基因改造，或制造一種新的蛋白質，以滿足人類的生產和生活的需要．
2、動物細胞培養的過程：取動物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉入培養液中（原代培養）→放入二氧化碳培養箱培養→貼滿瓶壁的細胞用酶分散為單個細胞，制成細胞懸液→轉入培養液（傳代培養）→放入二氧化碳培養箱培養．

解答 解：（1）取人羊膜組織刮除血塊、上皮細胞，沖洗后剪碎，然后用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）處理，去除細胞表面的糖蛋白，最終制成hAMSCs懸液．將細胞懸液放人培養瓶中進行原代培養，當細胞貼壁生長到一定階段時，出現接觸抑制現象，此時細胞停止分裂增殖，這時需要將細胞進行相關處理，然后進行傳代培養．
（2）10代以內的細胞可以保持正常的二倍體核型，因此傳至第 3 代的hAMSCs能保持細正常的（二倍體）核型．細胞分化的實質是基因的選擇性表達，因此要檢測 hAMSCs 是否分化成胰島 B 細胞，在誘導分化培養15天后，可提取細胞的RNA（或mRNA），用胰島素基因探針進行分子雜交．
（3）從圖中可以推測，免疫原性的生主要與抗體的C區有關．構建的人鼠嵌合抗體基因表達載體除了標記基因和目的基因外，還有啟動子、終止子．
（4）把大鼠肝腫瘤細胞和小鼠成纖維細胞融合成雜交瘤細胞，這些細胞既保持了合成大鼠肝細胞3種特異蛋白的能力，也合成了小鼠肝細胞這3種蛋白，但是在正常的小鼠成纖中從不合成這些．由此可見，融合實驗證明了小鼠成纖維細胞含有不表達的但肝細胞專一表達的基因，在特定條件下這些“閑置基因”也可表達．
故答案為：
（1）（糖）蛋白   細胞貼壁生長、接觸抑制現象
（2）（二倍體）核型    RNA（或mRNA）
（3）C  啟動子、終止子
（4）含有不表達的但肝細胞專一表達的基因，在特定條件下這些“閑置基因”也可表達

點評 本題結合圖解，考查蛋白質工程、動物細胞培養等知識，要求考生識記蛋白工程的概念及過程；識記動物細胞培養的過程及條件，能結合圖中信息準確判斷各選項，屬于考綱識記和理解層次的考查．