Question

Ⅰ．如圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線．圖中tet^R表示四環素抗性基因，amp^R表示氨芐青霉素抗性金銀，BamHI、HindIII、SmaI直線所示為三種限制酶的酶切位點．

據圖回答：
（1）圖中將人乳蛋白基因插入載體，需用

 

限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因．篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含

 

的培養基上進行．
（2）能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調控序列是

 

（填字母代號）．
A．啟動子    B．tet^R    C．復制原點     D．amp^R
（3）過程①可采用的操作方法是

 

（填字母代號）．
A．農桿菌轉化     B．大腸桿菌轉化     C．顯微注射     D．細胞融合
（4）過程②可采用的生物技術是

 

．
（5）對早期胚胎進行切割，經過程②可獲得多個新個體．這利用了細胞的

 

性．
（6）為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用

 

（填字母代號）技術．
A．核酸分子雜交     B．基因序列分析     C．抗原-抗體雜交     D．PCR
Ⅱ．某地區從1964年開始使用殺蟲劑殺滅蚊子幼蟲，至1967年中期停用．如圖是五年間蚊子幼蟲基因型頻率變化曲線．R表示殺蟲劑抗性基因，S表示野生敏感型基因．據圖回答：

（1）R基因的出現是

 

的結果．
（2）在RR基因型頻率達到峰值時，RS、SS基因型頻率分別為4%和1%，此時R基因的頻率為

 

．
（3）1969年中期RR基因型幾近消失，表明在

 

的環境條件下，RR基因型幼蟲比SS基因型幼蟲的生存適應能力

 

．
（4）該地區從此不再使用殺蟲劑．預測未來種群中，最終頻率最高的基因型是

 

，原因是

 

．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術,基因頻率的變化,胚胎移植

專題：

分析：分析題圖：圖示是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線，包括基因表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞、早期胚胎培養、胚胎移植等步驟，其中過程①是將重組質粒導入受體細胞；過程②需采用胚胎移植技術．
分析曲線圖：某地區從1964年開始使用殺蟲劑殺滅蚊子幼蟲，RR基因型頻率逐漸升高，而RS和SS基因型頻率逐漸降低；1967年中期停用殺蟲劑后，RR基因型頻率逐漸降低，而RS和SS基因型頻率逐漸升高．

解答： 解：（1）外源DNA分子上含有限制酶BamHI、HindIII、SmaI的切割位點，其中限制酶SmaI的切割位點位于目的基因上，所以獲取目的基因和構建基因表達載體時，應用限制酶HindⅢ和BamHⅠ．用限制酶HindⅢ和BamHⅠ切割質粒后，會破壞質粒上的四環素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含氨芐青霉素的培養基上進行．
（2）啟動子是能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調控序列．
（3）過程①是將重組質粒導入受體細胞，當受體細胞是動物細胞時，將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法．
（4）過程②需要采用胚胎移植技術．
（5）胚胎分割技術的理論基礎是細胞的全能性．
（6）為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用抗原-抗體雜交技術．
Ⅱ．（1）基因突變是產生新基因的途徑，R為殺蟲劑抗性基因，是基因突變產生的．
（2）RS、SS基因型頻率分別為4%、1%，則RR基因型頻率為95%，此時R基因的頻率=RR基因型頻率+

1

2

×RS基因型頻率=95%+2%=97%．
（3）1969年中期RR基因型幾近消失，表明在不在使用殺蟲劑的環境條件下，RR基因型幼蟲比SS基因型幼蟲的生存適應能力低．
（4）該地區從此不再使用殺蟲劑后，在不適用殺蟲劑環境下，持續的選擇作用使R基因頻率越來越低，因此未來種群中，最終頻率最高的基因型應該是SS．
故答案為：
Ⅰ．（1）HindⅢ和BamHⅠ氨芐青霉素
（2）A
（3）C
（4）胚胎移植技術
（5）全能
（6）C
Ⅱ（1）基因突變
（2）97%
（3）不在使用殺蟲劑   低
（4）SS   在不使用殺蟲劑環境下，持續的選擇作用使R基因頻率越來越低

點評：本題結合乳腺生物反應器培育過程圖和曲線圖，考查基因工程、胚胎工程、基因頻率的變化及生物進化等知識，要求考生識記基因工程的工具和操作步驟，能準確判斷圖中各過程的名稱或采用的技術；識記胚胎分割技術的理論基礎；掌握基因頻率的相關計算方法，能提取圖中有效信息答題．