Question

【題目】為解決塑料袋（化學成分為聚乙烯）造成的白色污染，某研究小組試圖從土壤中尋找一種能加速塑料袋自然降解過程的目的菌，以下為該研究小組從土壤中尋找并篩選目的菌的流程，請回答問題：

（1）對培養基滅菌常用的方法是________。在接種前需要檢測使用的培養基是否被污染，方法是________。

（2）圖中①表示對土壤懸浮液進行一系列的________，目的是使聚集在一起的微生物分散成單個細胞，從而能在Ⅰ號培養基表面形成單個菌落。在實驗中，研究者每隔24小時統計一次菌落數目，并選取菌落數目穩定時的記錄作為結果，這樣可以防止________。

（3）Ⅰ號培養基屬于________培養基（按功能分），其作用是使目的菌能“脫穎而出”，如圖采用的接種方法為________。

（4）假設該同學發現Ⅰ號培養基上菌落數目過多連成一片，說出一種可能的原因并提出合理的處理措施。

原因________________；措施：________________。

Answer 1

【答案】高壓蒸汽滅菌法 將未接種的培養基在適宜溫度的恒溫箱中倒置培養一段時間（或1～2 d），觀察是否有菌落生成 梯度稀釋 因培養時間不足導致遺漏細菌數目 選擇 稀釋涂布平板法 菌液濃度過高（或稀釋倍數不夠） 可以通過增大稀釋倍數解決

【解析】

1、無菌操作技術有消毒和滅菌，消毒有煮沸消毒法、巴氏消毒法和化學藥劑消毒法，滅菌有灼燒滅菌法適用于接種工具、干熱滅菌法適用于玻璃器皿和金屬工具、高壓蒸汽滅菌法適用于培養基及容器的滅菌。
2、接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，平板劃線分離法：由接種環以菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經培養后，可在平板表面得到單菌落。
稀釋平板計數是根據微生物在固體培養基上所形成的單個菌落，即是由一個單細胞繁殖而成這一培養特征設計的計數方法，即一個菌落代表一個單細胞。計數時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細胞分散開，使成單個細胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養基內。

（1）培養基常采用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌。在接種前需要檢測使用的培養基是否被污染，可以將未接種的培養基在適宜溫度的恒溫箱中培養一段時間，觀察是否有菌落生成，若有菌落生成，則已經被污染，否則沒有被污染。

（2）圖中①表示對土壤懸浮液進行一系列的梯度稀釋，目的是使聚集在一起的微生物分散成單個細胞，從而能在Ⅰ號培養基表面形成單個菌落。在實驗中，研究者每隔24小時統計一次菌落數目，并選取菌落數目穩定時的記錄作為結果，這樣可以防止因培養時間不足導致遺漏細菌數目。

（3）要篩選能降解聚乙烯塑料的微生物，應選擇以聚乙烯塑料為唯一碳源的選擇培養基。圖Ⅰ號培養基上采用的接種方法為稀釋涂布平板法。

（4）如果培養基上細菌數目過多連成一片，可能的原因是菌液濃度過高或操作過程不是無菌操作，還可能是接種時沒有把細菌分散開，采取的措施有：可以通過增大稀釋倍數解決（或培養過程中被雜菌污染；嚴格無菌操作程序。或利用接種針劃線時，劃下一個區域前沒有對接種針滅菌處理；每劃一個新的區域都要對接種針進行滅菌處理）。