Question

6．角膜緣干細胞能更新角膜上皮細胞，角膜上皮細胞對維持角膜的透明性至關重要．回答下列問題：
（1）將角膜緣組織剪碎，加入胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，可獲得大量游離分散的細胞．細胞懸液在培養瓶中培養，當貼壁生長的細胞發生接觸抑制現象時停止增殖．
（2）通常角膜緣干細胞的培養控制在10代以內，原因是保持細胞正常的二倍體核型．
（3）離體培養角膜緣干細胞時，一般需要在合成培養基中加入血清（或血漿）等天然成分，培養時所需的氣體主要有O₂和CO₂．
（4）研究發現，細胞因子能夠調控角膜緣干細胞分化．放線菌素D能通過阻礙RNA聚合酶的功能進而抑制細胞因子的調控，由此推斷該抑制過程發生在轉錄（選填“復制”、“轉錄”或“翻譯”）水平．
（5）研究還發現，皮膚干細胞可以誘導分化為角膜緣干細胞，這體現了皮膚干細胞具有發育的全能性．臨床上常用誘導干細胞定向分化的方法修補損傷或衰老的組織器官，從而解決了供體器官不足（或器官移植后免疫排斥）問題．

Answer 1

分析 1、動物細胞培養的流程：取動物組織塊（動物胚胎或幼齡動物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉入培養瓶中進行原代培養→貼滿瓶壁的細胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞繼續傳代培養．
2、動物細胞培養需要滿足以下條件：①無菌、無毒的環境；②營養；③溫度和pH；④氣體環境：95%空氣+5%CO₂．
3、動物細胞培養技術的應用：制備病毒疫苗、制備單克隆抗體、檢測有毒物質、培養醫學研究的各種細胞．
4、胚胎干細胞的主要用途是：
①可用于研究哺乳動物個體發生和發育規律；
②是在體外條件下研究細胞分化的理想材料．ES細胞在飼養層細胞上或在添加抑制因子的培養液中，能夠維持不分化的狀態．在培養液中加入分化誘導因子，如牛黃酸、丁酰環腺苷酸等化學物質時，就可以誘導ES細胞向分化，這為揭示細胞分化和細胞凋亡機理提供了有效的手段；
③可以用于治療人類的某些頑疾，如帕金森綜合癥、糖尿病、老年癡呆癥、肝衰竭、新衰竭、成骨不良；
④培育各種組織器官，用于器官移植，解決供體器官不足和器官移植后免疫排斥的問題．

解答 解：（1）將角膜緣組織剪碎，加入胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，可獲得大量游離分散的細胞．細胞懸液在培養瓶中培養，當貼壁生長的細胞發生接觸抑制現象時停止增殖．
（2）10代以內的細胞能保持細胞正常的二倍體核型，故通常角膜緣干細胞的培養控制在10代以內．
（3）離體培養角膜緣干細胞時，一般需要在合成培養基中加入血清（或血漿）等天然成分，培養時所需的氣體主要有O₂和CO₂．
（4）研究發現，細胞因子能夠調控角膜緣干細胞分化．RNA聚合酶是催化DNA轉錄形成RNA的酶．放線菌素D能通過阻礙RNA聚合酶的功能進而抑制細胞因子的調控，由此推斷該抑制過程發生在轉錄水平．
（5）研究還發現，皮膚干細胞可以誘導分化為角膜緣干細胞，這體現了皮膚干細胞具有發育的全能性．臨床上常用誘導干細胞定向分化的方法修補損傷或衰老的組織器官，從而解決了供體器官不足或器官移植后免疫排斥問題．
故答案為：
（1）胰蛋白酶或膠原蛋白酶        接觸抑制
（2）保持細胞正常的二倍體核型
（3）血清（或血漿）       O₂和CO₂
（4）轉錄
（5）發育的全能性     供體器官不足（或器官移植后免疫排斥）

點評 本題主要考查了動物細胞培養、胚胎干細胞的應用等相關知識，意在考查考生的識記能力和理解所學知識要點，把握知識間內在聯系，形成知識網絡結構的能力；能運用所學知識，準確判斷問題的能力，屬于考綱識記和理解層次的考查．