Question

下面是煙草葉片原生質體分離和培養的流程圖：

請回答：
（1）酶解時，在纖維素酶和果膠酶的混合液中，還需添加

 

來提高混合液的滲透壓，以利于獲得完整的原生質體．
（2）獲得原生質體后，可用

 

方法檢測原生質體是否存活．然后將原生質體制成懸浮液，滴加在

 

上，用顯微鏡觀察并計數．要判定原生質體是否已形成細胞壁，可用

 

方法鑒別．
（3）欲通過原生質體培養得到愈傷組織，從培養基的成分考慮，配制培養基時需要注意的主要方面有哪些？

 

．

Answer 1

考點：植物培養的條件及過程

專題：

分析：植物體細胞雜交是首先用纖維素酶和果膠酶去除細胞壁，獲得原生質體；用物理法（離心、振動、電刺激）或者化學法（聚乙二醇）誘導細胞融合，獲得融合的原生質體；原生質體再生出細胞壁，獲得雜種細胞；雜種細胞經過脫分化和再分化獲得雜種植株．

解答： 解：（1）在獲得植物原生質體時，需在0.5～0.6mol/L的甘露醇溶液環境（較高滲透壓）下用纖維素酶和果膠酶混合液處理實驗材料，將細胞壁消化除去，獲得球形的原生質體．
（2）獲得原生質體后可用紅墨水染色法檢測，因為生活狀態的原生質體細胞膜具有選擇透過性，原生質體不會被染上顏色，但如果原生質體死亡，由膜的選擇透過性喪失，原生質體會被染成紅色；對原生質體進行顯微計數，必須將原生質體制成的懸浮液滴加在血細胞計數板上；可用質壁分離實驗來檢測原生質體是否已經形成細胞壁．
（3）要將原生質體培養成愈傷組織，配置培養基時需要注意營養物質的適當配比和植物生長調節劑的適當配比．
故答案為：
（1）甘露醇
（2）紅墨水染色       血細胞計數板         質壁分離
（3）營養物質的適當配比和植物生長調節劑的適當配比

點評：本題考查原生質體分離和培養，意在考查考生能理解所學知識的要點，把握知識間的內在聯系，形成知識的網絡結構的能力．要注意，目前應用最廣泛的是聚乙二醇（PEG），因為它易得、簡便，且融合效果穩定．PEG的促融機制尚不完全清楚，它可能引起細胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團發生結構重排．