Question

16．2008年諾貝爾化學獎授予了三位在研究綠色熒光蛋白（GFP）方面做出突出貢獻的科學家．綠色熒光蛋白能在藍光或紫外光的激發下發出熒光，這樣借助GFP發出的熒光就可以跟蹤蛋白質在細胞內部的移動情況，幫助推斷蛋白質的功能．如圖為我國首例綠色熒光蛋白（GFP）轉基因克隆豬的培育過程示意圖，據圖回答：

（1）過程②中必須用同種限制酶對Ti質粒和綠色熒光蛋白基因進行切割．
（2）過程③將重組質粒導入豬胎兒成纖維細胞時，采用最多也最有效的方法是顯微注射法．
（3）如果將切取的GFP基因與抑制小豬抗原表達的基因一起構建到載體上，GFP基因可以作為基因表達載體上的標記基因．獲得的轉基因克隆豬可以解決的醫學難題是可以避免免疫排斥反應．
（4）目前科學家們通過蛋白質工程制造出了藍色熒光蛋白、黃色熒光蛋白等，采用蛋白質工程技術制造出藍色熒光蛋白過程的正確順序是②①③④（用數字表示）．
①推測藍色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列
②藍色熒光蛋白的功能分析和結構設計序列
③藍色熒光蛋白基因的修飾（合成）
④表達出藍色熒光蛋白．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示表示綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程，其中①表示目的基因的獲取；②為基因表達載體的構建過程；③是將目的基因導入受體細胞的過程．之后還采用了核移植技術、早期胚胎培養技術和胚胎移植技術．

解答 解：（1）基因工程中，構建基因表達載體時，需要用同種限制酶切割外源DNA分子和運載體，以形成相同的黏性末端．
（2）將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法．
（3）標記基因的作用是鑒定受體細胞中是否含有目的基因，如果將切取的GFP基因與抑制小豬抗原表達的基因一起構建到載體上，GFP基因可以作為基因表達載體上的標記基因．利用轉基因克隆豬技術可以在器官移植中避免發生免疫排斥反應．
（4）蛋白質工程的基本途徑：從預期的蛋白質功能出發，設計預期的蛋白質結構，推測應有的氨基酸序列，找到相對應的脫氧核苷酸序列（基因）以上是蛋白質工程特有的途徑；以下按照基因工程的一般步驟進行．因此，采用蛋白質工程技術制造出藍色熒光蛋白過程的正確順序是：②藍色熒光蛋白的功能分析和結構設計序列；①推測藍色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸；③藍色熒光蛋白基因的修飾（合成）；④表達出藍色熒光蛋白．
故答案為：
（1）同種限制酶
（2）顯微注射法
（3）標記基因     免疫排斥反應
（4）②①③④

點評 本題結合綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程圖，考查基因工程、蛋白質工程、動物細胞工程和胚胎工程的相關知識，要求考生識記基因工程的工具及操作步驟，能準確判斷圖中各過程的名稱；識記蛋白質工程的基本途徑；識記動物細胞核移植技術和胚胎工程技術的相關應用，能結合題圖答題．