Question

研究人員從血管內皮瘤中發現了一種新的血管增生抑制劑-內皮抑素，它能有效地抑制血管增生．下面是通過轉基因技術獲得內皮抑素的方法，請分析回答下列問題：
（1）從肝細胞中分離出RNA，經

 

過程獲得cDNA，再通過

 

擴增內皮抑素基因．
（2）擴增的目的基因與PUC18質粒（如圖所示）都用EcoRI和BamHI進行雙酶切，然后用DNA連接酶進行連接，構建重組質粒．雙酶切避免了目的基因與載體間的

 

連接，提高了重組質粒的比例．
（3）大腸桿菌pUC18質粒上的LacZ基因可表達出B-半乳糖苷酶，當培養基中含有IPTG和X-gal時，X-gal便會被B-半乳糖苷酶水解成藍色，大腸桿菌將形成藍色菌落；反之，則形成白色菌落．由此推知，選擇培養基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養物質外，還應加入

 

物質．成功導入重組質粒的大腸桿菌在培養基中形成

 

色的菌落，原因是

 

．
（4）從選擇培養基中挑取所需的單個菌落接種于液體培養基中培養，獲得粗提表達產物．將等量毛細血管內皮細胞接種于細胞培養板，37℃培養．將等量不同濃度的粗提表達產物加進培養孔中，72h后在顯微鏡下觀察細胞存活情況并

 

，實驗結果 如表所示．結果說明

 

．

粗提表達產物濃度（μg/ml）	0	2	4	6	8	10
活的內皮細胞數目（x100）	12	6	2	1	0.5	0.5

Answer 1

考點：基因工程的應用

專題：

分析：此題考查了基因工程技術，目的基因的獲得方法有三種：從基因文庫中獲取、PCR技術擴增、人工合成法；基因表達載體中的LacZ基因被插入滅活．據此解題．

解答： 解：（1）從肝細胞中分離出相應的RNA，經反轉錄（或逆轉錄）獲得內皮抑素基因，再利用PCR技術進行體外擴增，以獲得更多的目的基因．
（2）雙酶切后，目的基因兩端的黏性末端不同，被切開的運載體兩端的黏性末端也不同，這樣可以避免目的基因與載體反向連接，還能減少目的基因與目的基因、載體與載體的連接，提高了重組質粒的比例．
（3）大腸桿菌pUC18質粒的LacZ基因中如果沒有插入外源基因，LacZ基因便可表達出β半乳糖苷酶，當培養基中含有IPTG和Xgal時，Xgal便會被β半乳糖苷酶水解成藍色，大腸桿菌將形成藍色菌落．反之，則形成白色菌落．選擇培養基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養物質外，還應加入的物質有IPTG、X-gal和氨芐青霉素．因為重組質粒的LacZ基因中插入了目的基因，使LacZ基因不能表達出β-半乳糖苷酶，所以成功導入重組質粒的大腸桿菌在培養基中形成白色菌落．
（4）由表中數據可知，粗提表達產物濃度越高，活的內皮細胞數目越少，說明重組內皮抑素（或粗提表達產物）能夠抑制毛細血管內皮細胞的增殖．
故答案為：（1）反轉錄   PCR （2）反向  
（3）IPTG、X-gal和氨芐青霉素   白    重組質粒上的LacZ基因已被破壞而不能表達
（4）對活細胞進行計數   內皮抑素能有效地抑制血管增生

點評：本題考查基因工程的相關知識，意在考查考生的理解應用能力和信息轉化能力，屬于中等難度題．