Question

【題目】乳糖酶能夠催化乳糖水解為葡萄糖和半乳糖，具有重要應用價值。乳糖酶的制備及固定化步驟如下：

產乳糖酶微生物L的篩選→產乳糖酶微生物L的培養→乳糖酶的提取純化→乳糖酶的固定化

（1）表的培養液pH均為7．0，若要篩選微生物L，則不能選擇表中的___________培養液。

培養液	乳糖	乳糖酶	NaNO2	牛肉膏	K2HPO4	KCl	MgS4O7H2O	FeSO4
A	25g/L				1g/L	0．5g/L	1g/L	0．01g/L
B			3g/L		1g/L	0．5g/L	1g/L	0．01g/L
C	25g/L	1ug/L		3g/L	1g/L	0．5g/L	1g/L	0．01g/L
D	span>25g/L		3g/L		1g/L	0．5g/L	1g/L	0．01g/L

（2）為了獲得能產乳糖酶的微生物L的單菌落，可采用________法將初篩菌液接種在固體培養基上。

（3）擴大培養微生物L時，通過不斷增加營養物質的比例________（可以/不可以）提高種群密度，分析說明原因________________________。

（4）常用____________________法固定化乳糖酶。在建立和優化乳糖酶固定化酶柱時，優化酶反應時間可通過___________來調節。

（5）下圖是溫度對乳糖酶的固化酶和游離酶活力的影響曲線，該曲線表明固化酶和游離酶的最適溫度___________(從相同或不同選填)；低于或高于最適溫度時，固化酶的酶活力___________(從低于、等于或高于選填)游離酶。

Answer 1

【答案】ABC 平板劃線法或稀釋涂布平板 不可以 擴大培養的液體培養基由于營養物質濃度增高，滲透壓也增高，不利于細菌生長 物理吸附法或化學結合 控制（反應物）液體流速 相同 高于

【解析】

1、微生物的營養：碳源、氮源、水和無機鹽；

2、微生物的接種方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法；

3、從曲線圖中固化酶和游離酶的最適溫度重合，即二者的最適溫度相同。低于或高于最適溫度時，固化酶的酶活力均高于游離酶。

（1）分析題干信息可知，該實驗的目的是篩選微生物L，因此所用的培養基應該是乳糖作為唯一碳源的培養基，且培養基的基本成分應包括碳源，氮源、水和無機鹽，分析表格中的培養基的成分可知，D符合微生物L的培養要求，A培養基缺乏氮源，微生物不能生長；B沒有碳源，微生物應為無法生長；C不是以乳糖為唯一碳源，牛肉膏也可以作為碳源，因此A、B、C不能用于對篩選微生物L的培養基。

故選ABC。

（2）為了獲得能產乳糖酶的微生物L的單菌落，接種微生物時常用平板劃線法或稀釋涂布法，可將初篩菌液接種在固體培養基上。

（3）擴大培養的液體培養基由于營養物質濃度增高，滲透壓也增高，不利于細菌生長，故擴大培養微生物L時，不能通過增加營養物質的比例提高種群密度。

（4）與細胞相比，酶的分子量較小，常用物理吸附法或化學結合法固定化乳糖酶。在建立和優化乳糖酶固定化酶柱時，優化酶反應時間可通過控制（反應物）液體流速來調節。

（5）據圖分析可知，固化酶和游離酶的最適溫度重合，該曲線表明固化酶和游離酶的最適溫度相同；低于或高于最適溫度時，固化酶的酶活力均高于游離酶。