Question

【題目】圖1、圖2中箭頭表示相關限制酶的酶切位點。請回答下列問題：

（1）若圖2中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，現在要培養乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，科學家要將該基因通過___________（方法）注入羊的_______________中，發育完全的母羊有可能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁。

（2）基因工程技術中獲得目的基因后，利用PCR技術將該基因擴增，前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據這一序列合成________________________________________

（3）圖2中的目的基因D需要同時使用MetI和PstI才能獲得，而圖1所示的質粒沒有限制酶MetI的酶切位點。所以在用該質粒和目的基因構建重組質粒時，需要對質粒進行改造，構建新的限制酶切位點。試幫助完成構建需要的限制酶切位點的過程（提供構建需要的所有條件）：首先用______酶處理質粒；然后用______處理質粒，使被切開的質粒末端鏈接上相應的脫氧核苷酸；再用______ 處理質粒形成限制酶切位點，它可被______識別。（供選答案如下：①EcoRI ②MetI ③PstI ④DNA連接酶 ⑤DNA聚合酶）

Answer 1

【答案】 顯微注射法 受精卵 引物 1 5 4 2

【解析】試題分析：本題考查基因工程，考查對基因工程的工具、步驟的理解和識記。解答此題，應明確限制酶、DNA連接酶、DNA聚合酶的不同功能。

（1）培育轉基因動物，應將目的基因和質粒連接而成的基因表達載體通過顯微注射法注入羊的受精卵中中。。

（2）利用PCR技術擴增目的基因，需要根據目的基因的一段已知核苷酸序列合成引物。

（3）構建含有限制酶MetI酶切位點的質粒，首先用①EcoRI處理質粒；然后用⑤DNA聚合酶處理質粒，使被切開的質粒末端鏈接上相應的脫氧核苷酸；再用④DNA連接酶處理質粒，形成限制酶②MetI酶切位點。