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18．內皮素（ET）是一種含21個氨基酸的多肽，具有強烈的血管收縮和促進平滑肌細胞增殖等作用，其功能異常與高血壓、糖尿病、癌癥等有著密切聯系．ET主要通過與靶細胞膜上的ET受體結合而發揮生物學效應．ET_A是ET的主要受體，科研人員試圖通過構建表達載體，實現ET_A基因在細胞中高效表達，為后期ET_A的體外研究以及拮抗劑的篩選、活性評價等奠定基礎．其過程如圖所示，圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的識別序列為CCC^↓GGG，限制酶XhoⅠ的識別序列為C^↓TCGAG．請分析回答：

（1）完成過程①需要加入緩沖液、原料、逆轉錄酶和ATP和引物等，過程①的最后階段要將反應體系的溫度升高到95℃，其目的是使RNA鏈和DNA鏈分開．
（2）過程③和⑤中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使磷酸二酯鍵斷開，形成的黏性末端是；用兩種限制酶切割，獲得不同的黏性末端，其主要目的是使目的基因定向連接到載體上，以防止目的基因自身環化．
（3）構建的重組表達載體，目的基因上游的啟動子的作用是RNA聚合酶識別和結合的部位，驅動基因的轉錄，除圖示結構外，完整的基因表達載體還應具有復制原點、終止子等結構（至少寫出兩個結構）．
（4）過程⑥中，要用CaCl₂預先處理大腸桿菌，使其成為處于容易吸收外界DNA的感受態的細胞．
（5）利用SNAP基因與ET_A基因結合構成融合基因，目的是檢測ET_A基因能否表達及表達量．

17．圖1和圖2分別表示兩種獲取胚胎干細胞的途徑．圖1表示的是科學家把4個與胚胎發育相關的特異性基因導入成年小鼠細胞，培養出了誘導多潛能干細胞，稱為iPS細胞，類似于胚胎干細胞樣細胞，再將iPS細胞轉入小鼠乙體內培養，結果如圖所示．圖2表示研究人員利用小鼠（2N=40）獲取單倍體胚胎干細胞的一種方法，哺乳動物單倍體胚胎干細胞技術是遺傳學研究的新手段．請分析并回答下列問題：

（1）圖1過程中，通常選擇傳代培養10代以內的成纖維細胞導入特異性基因；成纖維細胞轉變為iPS細胞，類似于植物組織培養中的脫分化過程．
（2）克隆培養iPS細胞時，需要加入一定量的抗生素，以防止雜菌污染．早期研究發現在 iPS 細胞誘導培養的過程中會出現大量不具備干細胞功能的細胞，若用維生素C處理，能顯著提高iPS細胞的誘導成功率，推測其原因是維生素C可誘導其基因重編程．
（3）研究人員將iPS細胞團注射入缺乏T細胞的小鼠體內，細胞團能繼續生長．由此可推測圖1中iPS細胞團逐漸退化的原因是小鼠乙（受體）發生免疫反應．
（4）圖2中，研究人員需要對實驗小鼠丙注射促性腺激素使其超數排卵，從而獲得更多的卵母細胞，再利用SrC1₂溶液處理、激活卵母細胞，并在體外培養至[④]囊胚期，再利用流式細胞儀篩選出單倍體細胞．
（5）研究發現，單倍體胚胎干細胞也能分化，形成不同功能的細胞、組織和器官，該技術培育的單倍體動物可成為研究隱性（填“顯性”或“隱性”）基因功能的理想細胞模型．

16．為了從動物組織中提取純凈的DNA，首先要快速、有效地消化裂解動物組織細胞．消化裂解動物組織常用的方法有蛋白酶（如蛋白酶K）水解、表面活性劑處理、變性劑處理等．某科研人員擬使用加酶洗衣粉消化裂解豬肌肉樣本，并提取豬的DNA．實驗步驟如下：
①取500mg剪碎的豬肌肉組織于離心管中，加40mg加酶洗衣粉和1.5mL超純水混合，在一定溫度條件下水浴消化24h；
②加入苯酚、氯仿、異丙醇（25：24：1）混合液使蛋白質變性，抽提蛋白質；
③加0.2mg/mL的RNA水解酶于37℃水浴1h；
④加醋酸鈉和無水乙醇，高速離心15min；
⑤用70%乙醇洗滌沉淀兩次，風干，得到高純度的DNA．
請回答有關問題：
（1）加酶洗衣粉可以消化裂解動物組織細胞的原理是洗衣粉中的蛋白酶和表面活性劑等可以破壞細胞膜．
（2）步驟③的目的是水解RNA，去除雜質，步驟④中使用無水乙醇的目的是析出DNA，提取含雜質較少的DNA．
（3）將提取到的DNA用2mol/L的NaCl溶液溶解后，與二苯胺試劑共熱，冷卻后可觀察到溶液呈藍色．
（4）實驗中發現，實驗前將新鮮的豬肌肉組織置于液氮冷藏，與室溫下放置相同時間的等量豬肌肉組織相比，提取到的DNA含量較多，最可能的原因是低溫抑制了DNA酶的活動，減少DNA降解．
（5）如果要將加酶洗衣粉法提取DNA與蛋白酶K法提取DNA的效果進行對比，請簡要說明實驗設計思路將加酶洗衣粉換成蛋白酶K，重復上述實驗步驟，得到DNA后，測定DNA的量和純度，并與加酶洗衣粉組比較．

15．酵母菌作為一種常見的微生物，在傳統和現代生物技術中得到了廣泛的應用．請回答下列問題：
（1）酵母菌廣泛分布在自然界中，科研人員為了分離、篩選藍莓果酒專用酵母來改善藍霉果酒的品質，進行了如下實驗：
①取不同品種的成熟藍莓制果漿，置于適宜溫度的恒溫培養箱中自然發酵，直至產生大量氣泡和明顯酒味．取不同品種成熟藍莓的原因是不同品種藍莓上附著有不同品種的酵母菌．
②將藍莓發酵液用無菌水進行梯度稀釋后，進行涂布平板操作（每個梯度3個平板），恒溫培養2d，根據酵母菌菌落特征挑取單菌落．
③將挑取的單菌落擴大培養后，通過平板劃線法分離純化，然后保存菌種．
④檢測篩選菌株的發酵性能，根據實驗結果推知，BF-17（品種）對乙醇和酸的耐受性最強，是較理想的釀酒菌種．

品  種	乙醇體積分數/%					pH
	8%	10%	12%	14%	15%	4.00	2.98	2.03	1.48
葡萄釀酒酵母	++++	++++	+	-	-	++++	++++	-	-
BL-21	++++	++++	+	-	-	++++	++++	-	-
BF-09	++++	++++	++	-	-	++++	++++	+	-
BF-17	++++	++++	++	+	-	++++	++++	++	-

（注：+數量表示菌落數量的多少，-表示沒有菌落生長）
（2）如圖是固定化酵母發酵與游離酵母制作藍莓果酒發酵的對比結果，從圖中可以看出，兩者發酵速率相近，但發酵前期游離發酵比固定發酵產生的酒精量多，主要原因是游離酵母和營養液的接觸更充分，酒精排出更快；后期游離酵母發酵速度減慢，除了底物濃度降低外，還可能是因為酒精對游離酵母的抑制作用更強．相較于固定化酶技術，固定化酵母細胞常用的方法是包埋法，固定化酵母發酵的主要優點是可固定一系列酶，催化一系列化學反應．

14．花青素是構成花瓣和果實顏色的主要色素之一．廣泛存在于深紅色、紫色或藍色的蔬菜水果中，在酸性條件下偏紅，堿性條件下偏藍．
（1）牽牛花的花瓣顏色主要由花青素決定．凌晨3：00時，花瓣的顏色偏紅，理由是黑暗條件下，牽牛花只進行呼吸作用，細胞內二氧化碳含量較高，細胞液pH值下降，偏酸，使花青素顯示偏紅．
（2）為了使食品有花青素的顏色，需要進行色素的提取，工藝流程如下：
實驗原料$→_{添加金屬離子研磨}^{加75%酒精}$組織勻漿$→_{攪拌、離心}^{水浴保溫70分鐘}$上清液→測花青素提取率
若從食品安全角度考慮，研磨時對加入的酒精和金屬離子有一共同的要求是要對人無害或有益．興趣小組分別對水浴溫度進行了探究實驗．結果顯示，水浴溫度在69-71℃范圍內，提取率較高．他們認為要達到最高提取率，還必須對水浴溫度進行優化，并確定以此為探究課題．請為探究實驗設計一張實驗結果記錄表（注意體現實驗溫度的變化）

水浴溫度	69℃			70℃			71℃
分組編號	A	B	C	A	B	C	A	B	C
提取率
平均提取率

．
（3）紫色洋蔥鱗片葉外表皮細胞中也含有花青素而呈紫色．在“觀察植物細胞的質壁分離和復原”實驗中，對紫色洋蔥鱗片葉外表皮臨時裝片進行了三次觀察（如圖所示）．

第一次觀察時可觀察到紫色大液泡幾乎充滿細胞，大液泡周圍只有很薄的無色區域，原因是表皮展平在清水中，細胞吸水，液泡體積增大，幾乎充滿細胞．第二次觀察時可發現細胞的質壁分離首先發生在細胞的角隅處，此時細胞液的濃度將變大（增加），無色區域充滿蔗糖（外界）溶液．某學生在第三次觀察時，發現質壁分離不能復原，原因之一是蔗糖溶液濃度過高（或質壁分離時間過長），細胞已死亡．

13．為了研究光合作用與呼吸作用的關系，科研人員進行了觀察與實驗，并繪出相關坐標圖．請回答下列問題：

（1）圖1為電鏡下觀察繪制的亞顯微結構模式圖，圖1中①和③結構的基本支架是磷脂雙分子層；光照條件下，結構②中形成的產物有ATP、[H]、O₂；光照條件下，結構④中酶的主要功能是催化光合作用的暗反應．
（2）圖2表示某種植物黑暗條件下，在O₂濃度分別為a、b、c、d時CO₂釋放量和O₂吸收量的關系．假定細胞呼吸的底物都是葡萄糖，在O₂濃度為d時細胞的呼吸方式是（只進行）有氧呼吸，當O₂濃度為a時，無氧呼吸消耗的葡萄糖是有氧呼吸消耗的葡萄糖的5倍．
（3）圖3表示光照和溫度等適宜條件下，某種植物放在封閉溫室大棚內，測得大棚中一晝夜CO₂濃度變化的坐標圖．圖3的 A、B、C、D四個點中，光合產物積累最多的是C點．大田作物夏季中午光合速率明顯下降的過程稱作光合作用的午休現象，原因是夏季中午，植物體因溫度過高過度失水導致氣孔局部關閉，CO₂供應不足，導致暗反應減弱而出現午休現象．據圖3推測該植物光合作用有無午休現象？無．若連續三天，該大棚的環境條件保持不變，則該植物的總重量發生的變化是增加．

12．圖甲、圖乙分別是兩類高等生物細胞的亞顯微結構模式圖，請據圖回答：

（1）若圖甲表示洋蔥葉肉細胞，則④中CO₂進入⑨中被利用至少通過4層生物膜；若圖甲表示洋蔥根尖分生區細胞，則圖中不應該具有的細胞器有⑨⑩（填編號）．
（2）在圖甲、圖乙所示細胞中，含有遺傳物質的結構有③④⑨（填編號），不含生物膜結構的細胞器有⑦⑧（填編號）．
（3）結構②在圖甲細胞和圖乙細胞的功能不同，圖甲細胞中②結構的功能是與細胞壁的形成有關．在甲、乙細胞內，都能合成ATP的場所是④⑥ （填編號）．
（4）若圖乙所示的細胞為胰島B細胞，將³H標記的氨基酸注入該細胞，在該細胞的結構中，³H出現的先后順序是⑦→⑤→②→①（用箭頭和編號表示）．

11．下面是幾組同學所做的部分實驗，回答下列問題：

組別	實驗目的	實驗材料	所用試劑
①	植物組織中還原性糖的鑒定	西瓜汁	斐林試劑
②	植物細胞中脂肪的鑒定	花生子葉	酒精、蘇丹Ⅲ染液
③	生物組織中蛋白質的鑒定	血漿	雙縮脲試劑
④	探究溫度對酶活性的影響	淀粉、淀粉酶	斐林試劑
⑤	探究酵母菌的呼吸方式	酵母菌、葡萄糖溶液	澄清石灰水、重鉻酸鉀

（1）上述各組實驗中，所選材料不合理的一組是①．所用試劑不合理的一組是④（以上均填表中序號），原因是斐林試劑鑒定還原糖需要水浴加熱，會破壞該實驗設定的溫度條件，影響實驗結果的鑒定，正確的試劑應選用碘液．
（2）實驗②中，酒精的作用是洗浮色，與其他實驗相比，需用顯微鏡（儀器）進行觀察．
（3）雞血中蛋白質含量豐富，若用雞全血做蛋白質的鑒定實驗，需增加的實驗步驟是將雞全血靜置，待血細胞沉淀后，取上清液進行實驗．
（4）實驗⑤按照如圖裝置進行操作，如果兩組裝置中的澄清石灰水都變渾濁，能否說明酵母菌既能進行有氧呼吸，又能進行無氧呼吸？否，對實驗現象準確的描述應該是兩組裝置中的澄清石灰水都變渾濁，但甲組裝置中渾濁程度更大．

10．圖中①②③分別表示物質跨膜運輸的三種方式，下列表述正確的是（　　）

	A．	脂溶性小分子物質能通過方式①運輸
	B．	葡萄糖的跨膜運輸的方式為②或③
	C．	方式③的最大運輸速率與載體蛋白數量有關
	D．	抑制細胞呼吸對方式②和③的轉運速率均有很大影響

9．脂質體是以磷脂等物質制備的中空膜泡狀結構的人工膜，可用于介導基因的轉移．傳統的脂質體是將磷脂、膽固醇或其它脂類的乙醚溶液加入到DNA溶液中，經特殊處理而得到單層或雙層的包裹DNA的脂質體小泡，其可被受體細胞內吞而實現基因轉移．下列說法錯誤的是（　　）

	A．	脂質體介導基因轉移的原理是膜的流動性，可適用于多種動物受體細胞
	B．	若以植物細胞作為受體細胞，轉移前對植物細胞去壁可提高轉移效率
	C．	動物細胞膜具有特異性糖蛋白，對導入的脂質體小泡會產生免疫反應
	D．	可在包埋有抗癌藥物的脂質體表面插入單克隆抗體，介導癌癥的治療