Question

【題目】（1）細菌的CRISPR/Cas9系統(tǒng)通過將入侵噬菌體和質粒DNA的片段整合到CRISPR中，并利用相應的CRISPRRNAs（crRNAs）來指導同源序列的降解，從而提供免疫性。

Cas9在基因工程中起到類似于_______（ 填物質）的作用。CRISPR/Cas9 在基因敲除、基因治療等多方面顯示出廣闊的應用前景。若要進行基因治療，首先要獲得正�；�因，目前比較常用的方法之一是從cDNA文庫中獲取，但獲得的基因與人體內正�；�因相比要短，但若要獲得的是原核基因則基本相同，原因是___________________。

（2）科學家嘗試將某種重組基因導入小鼠體內，以研究該基因的作用機理，常用的導入方法是___________________。目前比較常用的導入對象是小鼠的胚胎干細胞，因為ES細胞在功能上具有________________。經(jīng)過早期胚胎培養(yǎng)之后獲得的胚胎需要經(jīng)過胚胎移植到_______雌性動物的體內，最終發(fā)育成具有新性狀的個體。

（3）為了提高胚胎的利用率，科學家選用發(fā)育良好的__________進行胚胎分割，在此過程中，需要注意的是______________分割。

Answer 1

【答案】限制酶 真核基因的編碼區(qū)是不連續(xù)的，轉錄時要剪切掉內含子，所以逆轉錄得到的基因要短于正�；�因，而原核細胞基因的編碼區(qū)則是連續(xù)的 顯微注射法 發(fā)育的全能性 同種的、生理狀態(tài)相同的 桑椹胚或囊胚 內細胞團均等

【解析】

1、哺乳動物的胚胎干細胞簡稱ES或EK細胞，是由早期胚胎或原始性腺中分離出來的一類細胞。胚胎干細胞具有胚胎細胞的特性，在形態(tài)上表現(xiàn)為體積小，細胞核大，核仁明顯；在功能上，具有發(fā)育的全能性，可分化為成年動物體內任何一種組織細胞。另外，在體外培養(yǎng)的條件下，可以增殖而不發(fā)生分化，可進行冷凍保存，也可進行遺傳改造。

2、將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不同。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。

3、進行胚胎分割時，應選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的桑椹胚或囊胚。分割時要注意將內細胞團均等分割，否則會影響分割后胚胎的恢復和進一步發(fā)育。

（1）Cas9系統(tǒng)能將入侵噬菌體和質粒DNA的片段整合到CRISPR中，對外源DNA進行切割，類似于限制酶的作用。cDNA文庫是由某生物發(fā)育的某個時期的mRNA反轉錄產生的DNA片段構成，由于真核基因的編碼區(qū)是不連續(xù)的，轉錄時要剪切掉內含子，所以逆轉錄得到的基因要短于正�；�因，而原核細胞基因的編碼區(qū)則是連續(xù)的，逆轉錄獲得的基因與原核基因基本相同。

（2）將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法。ES細胞在功能上，具有發(fā)育的全能性，可分化為成年動物體內任何一種組織細胞，常用來作基因工程的受體細胞。為提高胚胎移植的成活率，需要將早期胚胎移植到同種的、生理狀態(tài)相同的雌性動物的體內，最終發(fā)育成具有新性狀的個體。

（3）進行胚胎分割時，應選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的桑椹胚或囊胚。分割時要注意將內細胞團均等分割，否則會影響分割后胚胎的恢復和進一步發(fā)育。