Question

20．埃博拉病毒是一種RNA病毒，埃博拉病毒蛋白VP40在侵染過程中起著重要的作用，科學家構建重組VP40蛋白表達載體，將表達載體導入受體細胞，獲重組VP40蛋白，并將該蛋白注入小鼠體內，制備抗VP40蛋白單克隆抗體，過程如圖所示．

（1）過程①表示逆轉錄．
（2）pFastacl質粒上面至少要有EcoRⅠ、PstⅠ等限制酶切位點．
（3）過程②中是利用抗原-抗體雜交技術診斷編碼VP40是否翻譯．
（4）過程③篩選出的X是指能產生VP40蛋白抗體的雜交瘤細胞．
（5）抗VP40蛋白單克隆抗體具有純度高、特異性強特點，在埃博拉病毒感染早期診斷中發揮重要作用．

Answer 1

分析 1、圖示過程中，①表示逆轉錄過程，②表示利用抗原-抗體雜交技術檢測目的基因是否表達，③表示篩選出的X即指能產生VP40蛋白抗體的雜交瘤細胞的過程．
PCR技術的過程：高溫變性、低溫復性、中溫延伸．條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩定DNA聚合酶（Taq酶）．
2、獲得目的基因的方法：①從基因文庫中獲取  ②利用PCR技術擴增  ③人工合成（化學合成）．原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成．
3、DNA重組技術至少需要三種工具：限制性核酸內切酶（限制酶）、DNA連接酶、運載體．
4、目的基因的檢測與鑒定，常用基因探針--用放射性同位素（或熒光分子）標記的含有目的基因DNA片段．Ⅰ、分子水平上的檢測 ①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術Ⅱ、個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）據圖示可知，過程①為以RNA為模板，形成DNA的過程，故表示逆轉錄過程．
（2）由于目的基因一側為EcoR限制酶切位點，另一側為PstⅠ限制酶切位點，故pFastacl質粒上面至少要有 EcoRⅠ、PstⅠ等限制酶切位點．
（3）若檢測是否翻譯出相應的蛋白質VP40需利用抗原-抗體雜交技術看是否出現了雜交帶．
（4）過程③篩選出的X應既能產生相應抗體，又能無限增殖，即指能產生VP40蛋白抗體的雜交瘤細胞．
（5）與普通抗體相比較，抗VP40蛋白單克隆抗體具有純度高、特異性強特點，在埃博拉病毒感染早期診斷中發揮重要作用．
故答案為：
（1）逆轉錄 
（2）EcoRⅠ、PstⅠ
（3）抗原-抗體雜交
（4）能產生VP40蛋白抗體的雜交瘤細胞 
（5）純度高、特異性強

點評 本題難度不大，綜合性較強，考查了基因工程、單克隆抗體的制備等知識，要求考生具有扎實的基礎知識，并構建一定的知識網絡．