Question

【題目】《科學》上報道了人源γ－分泌酶結合淀粉樣前體蛋白（APP）的高分辨率冷凍電鏡結構，揭示了結合底物后γ－分泌酶發生的構象變化，并對這些構象變化的功能進行了生化研究，從而為研究與癌癥以及阿爾茲海默癥相關的特異性藥物設計提供了重要的結構信息�；卮鹣铝袉栴}：

（1）酶大規模應用于食品、醫藥等領域，于是出現了固定化酶和固定化細胞技術。固定化酶和固定化細胞技術是利用______________________________，包括_______________和物理吸附法。

（2）γ－分泌酶由4個跨膜蛋白亞基組成。若對γ－分泌酶4個跨膜蛋白亞基進行分離、純化及分子量測定，需采用________及電泳技術。前者是根據相對分子質量的大小分離蛋白質的有效方法，相對分子質量較大的跨膜蛋白移動速度_____（較快、較慢、無差異）。

?（3）電泳是指________在電場的作用下發生遷移的過程。電泳利用了待分離樣品中各種分子帶電性質以及分子本身的大小、形狀的不同，使帶電分子產生不同的_____，從而實現樣品中各種分子的分離。

（4）對γ－分泌酶的4個跨膜蛋白亞基進行分子量測定時，通常采用SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳的方法，SDS能使蛋白質完全變性，并解聚成單條肽鏈，SDS所帶負電荷的量大大超過了蛋白質分子原有的電荷量，因而掩蓋了不同蛋白質間的電荷差別，使該電泳遷移率完全取決于____________________________。

Answer 1

【答案】物理或化學方法將酶或細胞固定在一定空間內的技術??? 包埋法、化學結合法??? 凝膠色譜??? 較快??? 帶電粒子??? 遷移速度??? 相對分子量的大小???

【解析】

1、凝膠色譜法分離蛋白質的原理：相對分子質量不同的蛋白質通過凝膠時，相對分子質量較小的蛋白質容易進入凝膠內部的通道，路程較長，移動速度較慢；而相對分子質量較大的蛋白質無法進入凝膠內部的通道，只能在凝膠外部移動，路程較短，移動速度較快。相對分子質量不同的蛋白質分子因此得以分離。

2、電泳的原理：電泳利用了待分離樣品中各種分子帶電性質的差異以及分子本身的大小、形狀的不同，使帶電分子產生不同的遷移速度，從而實現樣品中各種分子的分離。

（1）固定化酶和固定化細胞技術是利用物理或化學方法，將酶或細胞固定在一定空間內的技術，包括包埋法、化學結合法（將酶分子或細胞相互結合，或將其結合到載體上）和物理吸附法。

（2）凝膠色譜法是根據相對分子質量的大小分離蛋白質的有效方法。由分析可知，相對分子質量較大的蛋白質只能在凝膠外部移動，路程較短，移動速度較快。

（3）電泳是指帶電粒子在電場的作用下發生遷移的過程。由分析可知，電泳利用了待分離樣品中各種分子帶電性質的差異以及分子本身的大小、形狀的不同，使帶電分子產生不同的遷移速度，從而實現樣品中各種分子的分離。

（4）蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移速率取決于它所帶凈電荷的多少以及分子的大小等因素，為了消除靜電荷對遷移速率的影響，可在凝膠中加入SDS，SDS能與各種蛋白質形成蛋白質—SDS復合物，SDS所帶負電荷的量大大超過了蛋白質分子原有的電荷量，因而掩蓋了不同種蛋白質間的電荷差別，使電泳遷移率完全取決于分子的大小。