Question

下圖是利用基因工程技術生產人胰島素的操作過程示意圖，請據圖作答。

（1）能否利用人的皮膚細胞來完成①過程？     。

原因是                                                    。

（2）過程②稱為                   。

（3）為使過程⑧更易進行，可用      處理D。

（4）下圖為上圖中質粒B的簡圖，小箭頭所指分別為限制性內切酶EcoRI、BamHI的酶切位點，amp^R為青霉素抗性基因，tct^R為四環素抗性基因，P為啟動子，T為終止子，ori為復制原點。已知目的基因的兩端分別有包括EcoRI、BamHI在內的多種酶的酶切位點。

①將上述連接產物導入無任何抗藥性的大腸桿菌細胞中然后接種到含青霉素的培養基中，能生長的大腸桿菌所含有的連接產物是                         。（2分，）

②在上述實驗中，為了防止目的基因和質粒在酶切后產生的末端發生任意連接，酶切時應選用的酶是                 。

（5）若要使A在體外通過③④⑤過程擴增，那么在此過程中所使用的酶是             。（2分）除酶外還需要加入引物，其作用是                                 。（2分）

 

Answer 1

【答案】

（1）不能 皮膚細胞中的胰島素基因未表達（或未轉錄），不能形成胰島素mRNA

（2）反轉錄（逆轉錄）   （3）Ca²⁺ （4）① 目的基因--質粒連接物、質粒--質粒連接物 （2分，答對一個只給一半分）     ②EcoRI和BamHI （2分）

（5）耐熱DNA聚合酶（2分）

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸（2分） 

【解析】

試題分析：皮膚細胞中的胰島素基因未表達不能形成胰島素mRNA，所以不能用人的皮膚細胞來通過反轉錄的方法獲取目的基因，用Ca²⁺處理受體細胞后有利于基因表達載體的導入。目的基因與質粒結合后有三種產物：目的基因--質粒連接物、質粒--質粒連接物、目的基因——目的基因，其中含有青霉素抗性基因的是目的基因--質粒連接物、質粒--質粒連接物。用EcoRI和BamHI酶切后產生的末端不同，可以防止末端發生任意連接。PCR技術用到的酶是耐熱DNA聚合酶，引物作用是使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸。

考點：基因工程

點評：本題考察了學生的理解分析能力，難度較大，解題的關鍵是理解目的基因與質粒結合時有三種情況。