Question

血紅蛋白是人和其他脊椎動物紅細胞的主要組成成分，負責血液中O₂和部分CO₂的運輸。請根據血紅蛋白的提取和分離流程圖回答問題。

（1）將實驗流程補充完整：A為________，B為________。凝膠色譜法的基本原理是根據________而達到蛋白質分離的有效方法。

（2）洗滌紅細胞的目的是去除________，洗滌次數過少，無法除去；離心速度過高和時間過長會使____________一同沉淀。達不到分離的效果。洗滌干凈的標志是________________。釋放血紅蛋白的過程中起作用的試劑是________________。

（3）在B過程中加入物質的量濃度為20mmol/L的磷酸緩沖液(pH為7.0)的目的是__________________________________________________________________。如果紅色區帶________________，說明色譜柱制作成功

Answer 1

（1）血紅蛋白的釋放 樣品的加入和洗脫 相對分子質量的大小

（2）雜蛋白（血漿蛋白） 白細胞（等） 離心后上清液中沒有黃色 蒸餾水和甲苯

（3）模擬生物體內的生理環境（保持體外pH和體內一致保持蛋白質的正常結構維持洗脫所需的壓力等合理答案均可）均勻一致的移動

蛋白質的提取和分離一般分為四步：樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定。樣品處理包括紅細胞的洗滌、血紅蛋白的釋放和分離血紅蛋白溶液；通過透析對血紅蛋白溶液進行粗分離，透析的原理是透析袋能使小分子自由進出而大分子則保留在袋內，從而除去分子量較小的雜質；然后通過凝膠色譜法將相對分子質量魘雜質蛋白除去，從而對樣品進一步純合，最后SDS—聚丙烯酰凝膠電泳進行純度鑒定。在B過程中加入物質的量濃度為20m mol/L的磷酸緩沖液(pH為7.0)的目的是模擬生物體內的生理環境（保持體外pH和體內一致、保持蛋白質的正常結構、維持洗脫所需的壓力等合理答案均可）；如果紅色區帶均勻一致的移動
，說明色譜柱制作成功。