Question

【題目】完成下列題目：

（1）基因工程的核心步驟是_________________________。

（2）PCR擴增過程中，延伸階段的實質是在_________________酶的作用下，合成子鏈。

（3）將目的基因導入大腸桿菌細胞中，常用_______處理細胞，使細胞處于感受態。

（4）單克隆抗體可制作診斷盒，用于準確、快速診斷H7N9病毒感染者，這種診斷運用了______________雜交技術。

（5）受精卵在體外培養時，培養液中除了加水、無機鹽、維生素、葡萄糖、氨基酸等分泌的營養成分外，往往需要特別加入__________，同時在含5%_______的無菌、恒溫培養箱中進行培養。

（6）在胚胎移植前，通過__________技術可獲得較多胚胎。在胚胎移植過程中，供體、受體動物選擇好后，要用激素進行_____________處理，使供、受體的生理狀態相同。

（7）動物細胞融合技術常用的誘導因素有PEG、電激、和___________________，培養液中共有_____種類型的融合細胞（只考慮兩兩融合）。

Answer 1

【答案】基因表達載體的構建 熱穩定DNA聚合（或Taq） Ca2+（或CaCl2） 抗原—抗體 血清 CO2 胚胎分割 同期發情 滅活的病毒 3

【解析】

1、基因工程技術的基本步驟：

（1）目的基因的獲取的方法有：從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

2、單克隆抗體制備的大致過程是利用特定抗原刺激小鼠產生已免疫的B淋巴細胞，提取這種B淋巴細胞與小鼠體內提取的具有無限增殖能力的骨髓瘤細胞融合，經過不斷篩選，得到既能迅速增殖又能產生特異性抗體的雜交瘤細胞，再經過細胞培養，制備提純出所需的單克隆抗體。

3、動物細胞培養的條件：①無菌、無毒的環境：消毒、滅菌；添加一定量的抗生素；定期更換培養液，以清除代謝廢物。②營養物質：

糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質。③溫度和pH。④氣體環境：95%空氣和5%的CO2，其中CO2的作用是調節細胞培養液的pH。

4、細胞融合技術突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能。誘導動物細胞融合時，常用的誘導因素有聚乙二醇、電激和滅活的病毒等。

（1）基因工程的核心步驟是基因表達載體的構建 。

（2）PCR擴增技術合成子鏈時用的是熱穩定DNA聚合酶（或Taq酶）。

（3）將目的基因導入微生物細胞中，常用Ca2+（或CaCl2）處理細胞，使細胞處于感受態。

（4）特異性抗體與與相應抗原具有特異性結合的特性，利用抗原-抗體雜交技術可以將單克隆抗體制成診斷盒，用于準確、快速診斷H7N9病毒感染者。

（5）受精卵在體外培養時，需要向培養液中添加血清等天然物質，同時在含5%CO2的的無菌、恒溫培養箱中進行培養。

（6）胚胎分割是指采用機械方法將早期胚胎切割成2等份、4等份或8等份等，經移植獲得同卵雙胎或多胎的技術。所以在胚胎移植前，通常通過胚胎分割技術獲得較多的胚胎。在胚胎移植過程中，供體、受體動物選擇好后，要用激素進行同期發情處理，使供、受體的生理狀態相同。

（7）在誘導細胞融合時，常用的誘導因素有PEG、電激和滅活病毒，若考慮兩兩融合，則有AA、BB和AB三類細胞。