Question

【題目】某種廣泛被使用的除草劑（含氮有機化合物）在土壤中不易降解，長期使用可污染土壤。為修復被該除草劑污染的土壤，可按下面程序選育能降解該除草劑的細菌（已知該除草劑在水中溶解度一定，該除草劑的培養基不透明，培養皿中會殘留少量無菌空氣）

（1）制備土壤浸出液時，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進行__________處理。

（2）要從長期使用該除草劑的土壤中分離目的菌，從物理性質、營養成分的角度要求上述培養基具備特點是____________________________。若需要調節培養基pH，應該在各種成分都溶化后且分裝_____（填“前”或“后”）進行。對培養基進行滅菌，常采用的方法是__________。

（3）圖中形成的菌落中，無透明帶菌落利用的氮源可能是__________，有透明帶菌落利用的氮源主要是該除草劑，據此可篩選出目的菌。

（4）若對活菌進行計數，常用的接種方法為__________。為了計數微生物的數量，一位同學在4個平板培養基上分別接種稀釋倍數為106的土壤樣液0.1mL，培養后菌落數分別為155、160、176、149個，則每毫升原土壤樣液中上述微生物數量為__________。

Answer 1

【答案】稀釋 以除草劑為唯一氮源的固體培養基 前 高壓蒸汽滅菌 N2 稀釋涂布平板法 1.6×109個

【解析】

分析題圖：該實驗是從土壤中篩選分離能降解除草劑的微生物的過程。這樣的實驗要將土壤稀釋處理，以除草劑為唯一的氮源進行處理篩選土壤微生物，以菌落計數法進行統計計數。

（1）制備土壤浸出液時，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進行稀釋處理。

（2）要從長期使用該除草劑的土壤中分離目的菌，從物理性質、營養成分的角度要求上述培養基的特點是：固體培養基且以除草劑作唯一氮源；若需要調節培養基pH，應該在各種成分都溶化后且分裝前進行；對培養基進行滅菌常采用高壓蒸汽滅菌法。

（3）根據題中信息“該除草劑的培養基不透明”，則可知無透明帶菌落利用的氮源并不是除草劑，而是來自空氣中的氮氣，有透明帶菌落利用的氮源為除草劑。

（4）接種微生物常用平板劃線法和稀釋涂布平板法，其中稀釋涂布平板法還可用于對微生物進行計數。在4個平板培養基上分別接種稀釋倍數為106的土壤樣液0.1mL，培養后菌落數分別為155、160、176、149個，則每毫升原土壤樣液中上述微生物數量為（155+160+176+149）÷4÷0.1×106=1.6×109個。