Question

28．（5分）（2012福建卷）肺細胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發肺癌。研究人員利用基因工程技術將let-7基因導入肺癌細胞實驗表達，發現肺癌細胞的增殖受到抑制。該基因工程技術基本流程如圖１。

請回答：

(1) 進行過程①時，需用　　　　酶切開載體以插入let-7基因。載體應用RNA聚合酶識別和結合的部位，以驅動let-7基因轉錄，該部位稱為　　　　。

(2) 進行過程②時，需用　　　　酶處理貼附在培養皿壁上的細胞，以利于傳代培養。

(3) 研究發現，let-7基因能影響RAS的表達，其影響機理如圖２。據圖分析，可從細胞提取　　　　進行分子雜交，以直接檢測let-7基因是否轉錄。肺癌細胞增殖受到抑制，可能是由于細胞中　　　　（RASmRNA/RAS蛋白）含量減少引起的。

Answer 1

28.【答案】（10分）

（1）限制性核酸內切酶（或限制）   啟動子

（2）胰蛋白

（3）RNA   RAS蛋白

【解析】

（1）過程①表示基因表達載體的構建，在該過程中需要用限制酶對載體進行切割以便于目的基因的插入（限制性核酸內切酶，簡稱限制酶，寫其他的不得分）；啟動子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶結合和識別的位點，RNA聚合酶結合到該位點，可驅動轉錄過程。

（2）過程②表示動物細胞培養，培養過程中出現接觸抑制后可以用胰蛋白酶處理，使之分散成單個的細胞，之后分裝到其他培養瓶里面進行傳代培養。

（3）判斷目的基因是否在受體細胞中轉錄，可用分子雜交技術來進行，從細胞中提取mRNA和用放射性同位素或者熒光標記的目的基因單鏈DNA片段進行雜交。根據題中信息“肺組織細胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達就增強，引發肺癌”導入let7基因后，肺癌細胞受到抑制，說明RAS基因表達減弱，導致細胞中的RAS蛋白質含量減少進而導致癌細胞受抑制。