Question

科學家將魚抗凍蛋白基因轉入番茄，使番茄細胞的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環境中生長。質粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四種限制酶切割位點，下圖是轉基因抗凍番茄培育過程的示意圖(amp^r為抗氨芐青霉素基因)，其中①～④是轉基因抗凍番茄培育過程中的相關步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關結構或細胞。請據圖回答問題。

(1)在構建基因表達載體時，可用一種或者多種限制酶進行切割。為了避免目的基因和載體在酶切后產生的末端發生任意連接，在此實例中，應該選用___________, __________限制酶，分別對_______________, ______________進行切割。

(2)培養基中的氨芐青霉素會抑制番茄愈傷組織細胞的生長，要利用該培養基篩選已導入魚抗凍蛋白基因的番茄細胞，應使基因表達載體中含有________________________，作為標記基因。

(3)研究人員通常采用農桿菌轉化法將魚抗凍蛋白基因導入番茄細胞內。通常采用______________________技術，在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應的蛋白質。

(4)利用組織培養技術將導入魚抗凍蛋白基因的番茄組織細胞培育成植株。圖中③、④依次表示組織培養過程中番茄組織細胞的____________, ______________過程。

 

Answer 1

【答案】

8分   

(1)含PstⅠ     SmaⅠ　 魚抗凍蛋白基因的DNA、  質粒

(2)抗氨芐青霉素基因(amp^r)　

(3)抗原—抗體雜交

(4)脫分化、  再分化

【解析】

試題分析：

(1)在此實例中，應該選用PstⅠ, SmaⅠ限制酶，分別對魚抗凍蛋白基因的DNA, 質粒進行切割。切割下來的魚抗凍蛋白基因左側是SmaI的切口，右側是PstI的切口，粘性末端不同，這樣切出的目的基因（魚抗凍蛋白基因）不會發生自生環化現象，質粒的處理同上。

(2)培養基中的氨芐青霉素會抑制番茄愈傷組織細胞的生長，要利用該培養基篩選已導入魚抗凍蛋白基因的番茄細胞，應使基因表達載體中含有抗氨芐青霉素基因(amp^r)，作為標記基因。

(3)通常采用農桿菌轉化法將魚抗凍蛋白基因導入番茄細胞內,采用抗原—抗體雜交技術，在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應的蛋白質。

(4)利用組織培養技術將導入魚抗凍蛋白基因的番茄組織細胞培育成植株,體現植物細胞的全能性。圖中③、④依次表示脫分化、再分化。

考點：基因工程。

點評：本題相對綜合，可以通過理解記憶的方法平時加以訓練。