Question

6．豬的基因和人類的基因存在一定的相似度．據報道經特殊處理的豬皮可在人身上存活3周左右，起保護創面免受感染的作用．移植豬皮后，還要在豬皮上開很多小口，在小口處植入患者的自體皮膚組織，自體皮膚慢慢生長，逐漸覆蓋原先創面，而豬皮最終會掉光．為了使移植的豬皮存活更長時間，有人設法導入人的相關基因（用P表示），獲得轉基因小白豬．其簡要流程如下圖所示：

據圖中信息并結合課本知識回答：
（1）過程①中形成重組DNA常用的酶有限制性核酸內切酶和DNA連接酶；將目的基因導入成纖維細胞常用的方法是顯微注射法．
（2）過程②中，常用胰蛋白（或膠原蛋白）酶處理，將皮膚組織塊分散成單個成纖維細胞．在培養成纖維細胞時需要滿足的條件是無菌、無毒、通氣、適宜的溫度、pH以及營養．
（3）圖中的卵母細胞應在體外培養到減數第二次分裂中期（或MII中期），并作除去細胞核的處理；過程③中所用的技術是（早期）胚胎體外培養；能代替圖中卵母細胞的還可以是去核的受精卵（或去核的卵細胞）．
（4）移植后的胚胎能在受體子宮中存活的生理基礎是受體子宮對外來胚胎不發生免疫排斥反應．

Answer 1

分析 根據圖示，可知①是基因表載體的構建、②是動物細胞培養、③是早期胚胎培養．
通過核移植技術形成重組細胞，首先對供體用促性腺激素處理，使其超數排卵；另需要將卵母細胞培養到減數第二次分裂中期才可以去核．
動物細胞培養基含有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質，另外需要無菌和無毒的環境．

解答 解：（1）在構建表達載體時，要用同一種限制酶切割質粒和目的基因，使質粒和目的基因產生相同的末端，再用DNA連接酶連接成重組質粒．受體細胞是動物細胞，可以通過顯微注射法將目的基因轉化入受體細胞．
（2）動物細胞培養時，取動物組織塊（動物胚胎或幼齡動物的器官或組織），用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞．動物細胞培養需要在無菌、無毒的環境、營養物質充沛、適宜的溫度和PH、氣體環境等條件．
（3）卵母細胞應在體外培養到減數第二次分裂中期（或MII中期），并作除去細胞核的處理；過程③中所用的技術是（早期）胚胎體外培養；能代替圖中卵母細胞的還可以是去核的受精卵（或去核的卵細胞）．
（4）移植后的胚胎能在受體子宮中存活的生理基礎是受體子宮對外來胚胎不發生免疫排斥反應．
故答案為：
（1）DNA連接酶      顯微注射法
（2）胰蛋白（或膠原蛋白）      營養
（3）減數第二次分裂中期（或MII中期）     （早期）胚胎體外培養     去核的受精卵（或去核的卵細胞）
（4）受體子宮對外來胚胎不發生免疫排斥反應

點評 本題綜合考查了細胞工程、胚胎工程和基因工程的相關知識，考生要識記基因工程的操作工具；掌握目的基因檢測和鑒定的方法；識記動物細胞培養的過程和培養條件等；明確卵母細胞在進行細胞核移植前的準備；識記胚胎工程和基因工程的相關應用．