綠色熒光蛋白(GFP)是由GFP基因表達的一種能在紫外線照射下發出綠色熒光的蛋白質，它首先在水母中發現。如圖為培育綠色熒光蛋白轉基因豬的流程圖，此豬的獲得，運用了哪些技術
①轉基因技術②核移植技術③早期胚胎培養技術④胚胎移植技術等⑤顯微注射技術⑥胚胎分割技術
A．①②③④⑥ B．①②④⑤⑥ C．①②③④⑤ D．①②③④⑤⑥
文敬圖書課時先鋒系列答案科目：高中生物 來源： 題型：
下村修1962年在普林斯頓大學做研究的時候從一種水母身上分離出綠色熒光蛋白(GFP)。當時知道在藍光或紫外光的激發下，它會發出綠色熒光。科學家1992年克隆出了GFP基因，隨后馬丁·沙爾菲成功地讓GFP基因在大腸桿菌和線蟲中表達。之后，會發光的鼠、豬、貓、兔、蝌蚪、魚等也相繼問世。如圖是轉基因綠色熒光鼠的培育過程，有關轉基因綠色熒光鼠的說法不正確的是( )
A．與體內DNA復制相比，PCR技術復制GFP基因也需加入解旋酶和DNA聚合酶
B．過程①構建的基因表達載體的組成必須含有啟動子、終止子、復制原點、GFP基因和標記基因
C．過程④選擇代孕母鼠的條件是有健康的體質和正常繁殖能力的個體
D．如果將外源基因導入小鼠受精卵，則外源基因可能隨機插入到小鼠受精卵DNA中，這種受精卵有的可發育成轉基因小鼠，有的卻死亡
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科目：高中生物 來源：2010年廣東省汕頭市金山中學高二下學期期中試題生物卷 題型：綜合題
2008年諾貝爾化學獎授予了三位在研究綠色熒光蛋白(GFP)方面做出突出貢獻的科學家。綠色熒光蛋白能在藍光或紫外光的激發下發出熒光，這樣借助GFP發出的熒光就可以跟蹤
蛋白質在細胞內部的移動情況，幫助推斷蛋白質的功能。我國首例綠色熒光蛋白轉基因克隆豬在東北農業大學的種豬場自然分娩產出，這標志著我國在轉基因克隆豬技術領域已達到世界領先水平。下圖為我國首例綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程示意圖，請據圖回答：
（1）圖中通過過程①、②形成重組質粒，需要限制性內切酶切取目的基因、切割質粒。若限制性內切酶Ⅰ的識別序列和切點是一G↓GATCC一，限制性內切酶Ⅱ的識別序列和切點是—↓GATC一。在質粒上有酶I的一個切點，在目的基因的兩側各有1個酶Ⅱ的切點。
①請畫出質粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端。
②在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接起來? ＿＿＿＿＿。理由是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
（2）GFP基因與目的基因一起構建到載體上不影響目的基因的表達，也不影響由目的基因控制合成的蛋白質的結構與功能,且對細胞無毒性作用，因此GFP基因可以運用作為基因表達載體上的＿＿＿＿＿＿。
（3）過程③將重組質粒導入豬胎兒成纖維細胞時，采用最多也最有效的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。然后還要通過＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿技術來檢測綠色熒光蛋白基因是否已重組到豬胎兒成纖維細胞的染
色體DNA上。
（4）為了獲得更多的豬卵母細胞，可通過對母豬注射＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的方法，做超數排卵處理，并將所采集到的卵母細胞在體外培養到＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿期即可通過顯微操作將其細胞核去除。
（5）早期胚胎的培養液成分較復雜，除一些無機鹽和有機鹽類外，還需添加維生素、激素、＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿等物質。
（6）綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程屬于＿＿＿＿＿＿生殖。目前科學家們通過蛋白質工程制造出了藍色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質工程技術制造出藍色熒光蛋白過程
的正確順序是：＿＿＿＿＿＿(用數字表示)。
①推測藍色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列
②藍色熒光蛋白的功能分析和結構設計
③藍色熒光蛋白基因的修飾(合成)
④表達出藍色熒光蛋白
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科目：高中生物 來源：2013屆黑龍江省高二下學期期末考試生物試卷（解析版） 題型：綜合題
美籍華裔科學家錢永鍵和日本海洋生生學家下村修等人因在研究綠色熒光蛋白(GFP)方面的突出貢獻，獲得了2008年諾貝爾化學獎。下圖是我國首例綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程示意圖，據圖回答：
(1)圖中通過①、②過程形成重組質粒，需要用同一種限制酶切割目的基因和質粒。限制酶的特點是 。
(2)③過程將重組質粒導入豬胎兒成纖維細胞時，采用最多也最有效的方法是 。
(3)如果將切取的GFP基因與抑制小豬抗原表達的基因一起構建到載體上，GFP基因可以作為基因表達載體上的標記基因，其作用是 。
(4)以上培育過程中應用到的生物技術主要有 、 、 等。(寫三項即可)
(5)④過程形成重組細胞時應用 期的卵母細胞，去掉其細胞核的原因是 。
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科目：高中生物 來源：2011-2012學年浙江省高三上學期期中考試生物試卷 題型：綜合題
(6分)2008年諾貝爾化學獎授予了三位在研究綠色熒光蛋白(GFP)方面做出突出貢獻的科學家。綠色熒光蛋白(GFP)會發出綠色熒光，可借助熒光跟蹤蛋白質在細胞內部的移動情況，幫助推斷蛋白質的功能。下圖表示培育綠色熒光小鼠的基本流程：
請根據上述材料回答下列問題：
(1)在某種生物中檢測不到綠色熒光，將水母綠色熒光蛋白基因轉入該生物體內后，結果可以檢測到綠色熒光。由此可知（ ）
A．該生物的基因型是雜合的
B．該生物與水母有很近的親緣關系
C．綠色熒光蛋白基因在該生物體內得到了表達
D．改變綠色熒光蛋白基因的1個核苷酸對，就不能檢測到綠色熒光
(2) 在培育綠色熒光小鼠的過程中，基因表達載體的構建是核心。完整的基因表達載體至少包括目的基因、________、終止子和啟動子等部分。
(3) 上圖操作流程中用到的工具酶有________。
(4) 為迅速增加綠色熒光小鼠的數量，可采用胚胎工程技術有超數排卵受精，
、
。
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科目：高中生物 來源：2013屆廣東省梅州市高二第二學期3月月考生物試卷 題型：綜合題
美籍華人錢永健和日本下村修、美國沙爾菲因等在研究綠色熒光蛋白(GFP)等方面的突出貢獻，獲得2008年度諾貝爾化學獎。GFP會發出綠色熒光，該蛋白質在生物工程中有著廣闊的應用前景。請據圖回答：
(1)過程①中獲取綠色熒光蛋白基因的工具是____________，該基因在實驗中是________基因。
(2)過程②形成重組質粒用到的酶是_________________ ______，
過程③采用的方法是__________ ______。
(3)在過程④進行轉基因體細胞的篩選時，比較簡易的方法是
________________________________________________________________ ________。
(4)在過程⑥培養重組細胞時，培養液中通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素以及____________等天然成分。
(5)以上培育過程中，④和⑤應用到的生物技術名稱分別是________________、_____ 。
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