Question

 (12分) 下圖是培育表達(dá)人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的技術(shù)。圖中tet^R表示四環(huán)素抗性基因，amp^R表示氨芐青霉素抗性基因，BamHⅠ、Hind Ⅲ、SmaⅠ直線所示為三種限制酶的酶切位點(diǎn)。

據(jù)圖回答：

(1)圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用       限制酶同時(shí)酶切載體和人乳鐵蛋白基因,篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含        的培養(yǎng)基上進(jìn)行。

(2)能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的調(diào)控序列是　  (填字母代號(hào))。

A．啟動(dòng)子       B．tet^R       C．復(fù)制原點(diǎn)      D．a(chǎn)mp^R

(3)過程①采用的操作方法是         (填字母代號(hào))。

A．農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化     B．大腸桿菌轉(zhuǎn)化   C．顯微注射    D．基因槍法

(4)為檢測人乳鐵蛋白是否表達(dá)成功，可采用        (填字母代號(hào))技術(shù)。

A．核酸分子雜交    B．基因序列分析   C．抗原－抗體雜交    D．PCR

(5)基因工程的核心步驟是              

 

Answer 1

【答案】

(（12分,每空2分) k&s%5u

(1)Hind Ⅲ和BamHⅠ　氨芐青霉素      (2)A　(3)C  (4) C 

(5)構(gòu)建基因表達(dá)載體

【解析】由圖示可知：需用HindⅢ和BamHⅠ限制酶同時(shí)酶切載體和人乳鐵蛋白基因，因酶切后tetR四環(huán)素抗性基因結(jié)構(gòu)被破壞而ampR結(jié)構(gòu)完好，故用含氨芐青霉素的選擇培養(yǎng)基可篩選含有重組載體的大腸桿菌。啟動(dòng)子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，可調(diào)控基因的特異性表達(dá)。過程①表示把重組載體導(dǎo)入受體細(xì)胞的過程，當(dāng)受體細(xì)胞為動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，常采用顯微注射法。過程②表示把早期胚胎移植到代孕母牛子宮的過程，屬于胚胎移植技術(shù)。)經(jīng)過程②得到新個(gè)體是細(xì)胞全能性的體現(xiàn)。人乳鐵蛋白基因是否成功表達(dá)，關(guān)鍵看是否有其表達(dá)產(chǎn)物即人乳鐵蛋白，可用抗原—抗體雜交法檢測該蛋白是否存在。基因工程過程的關(guān)鍵步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建。