Question

7．人外周血單核細胞能合成白細胞介素2（IL-2）．該蛋白可增強機體免疫功能，但在體內易被降解．研究人員將IL-2基因與人血清白蛋白（HAS）基因拼接成一個融合基因，在酵母菌中表達出具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2-HSA融合蛋白．技術流程如圖．請回答：
（1）圖中③過程的原料是IL-2的cDNA，表達載體1中的位點a 應為限制酶BglⅡ的識別位點，才能成功構建表達載體2．
（2）表達載體2導入酵母菌后，融合基因轉錄出的mRNA中，與IL-2蛋白對應的堿基序列不能含有終止密碼子，才能成功表達出IL-2-HSA融合蛋白．啟動子是識別和結合的部位，有了它才能驅動基因轉錄出mRNA．
（3）培養人外周血單核細胞時，需要將溫度控制在37℃，此外還需要通入無菌的95%空氣和5%CO₂  （氣體）．
（4）應用抗原抗體雜交技術可檢測酵母菌是否表達出IL-2-HSA融合蛋白．
（5）如果基因表達載體2導入的是優質奶牛的受精卵細胞，經胚胎培養后移入受體母牛子宮內可以存活的生理學基礎是母牛子宮對外來胚胎基本上不發生免疫排斥反應．

Answer 1

分析 分析題圖：①表示從人的外周學細胞去mRNA；②表示以mRNA為模板逆轉錄形成cDNA的過程；③表示基因表達載體的構建過程，需要限制酶和DNA連接酶．目的基因IL-2cDNA的兩端的酶切位點分別是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表達載體1也必須有這兩個酶切位點，而表達載體1上已有EcoRⅠ，因此位點a應含有BglⅡ．

解答 解：（1）PCR是在體外條件下復制特定DNA片段的技術，該過程需要引物、模板和特定的酶，因PCR產物是白細胞介素2（IL-2），故模板是含有目的基因（IL-2基因）的cDNA．目的基因IL-2cDNA和表達載體1在構建表達載體2時需先用限制酶切割讓二者獲得相同的黏性末端，然后在DNA連接酶的作用下重新組合．根據目的基因IL-2cDNA的兩端的酶切位點分別是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表達載體1也必須有這兩個酶切位點，而表達載體1上已有EcoRⅠ，因此位點a應含有BglⅡ．
（2）融合基因轉錄出的mRNA中與IL-2蛋白對應的堿基序列中不能含有終止密碼，才能成功表達出IL-2-HsA融合蛋白．否則HSA蛋白將無法合成．
（3）動物細胞培養，所需要的條件是：95%空氣和5%CO₂氣體環境、適宜溫度（37℃）和PH、無毒無菌的環境及合適的營養成分，其培養基中通常需加入血清、血漿等一些天然成分．
（4）檢測酵母菌是否表達出IL-2-HSA融合蛋白可用抗原抗體雜交技術．
（5）胚胎移植時發情期母牛子宮對外來胚胎基本上不發生避免排異反應反應，所以胚胎培養后移入受體母牛子宮內可以存活．
故答案為：
（1）IL-2的cDNA   a
（2）終止密碼子   
（3）37   無菌的95%空氣和5%CO₂
（4）抗原抗體雜交
（5）母牛子宮對外來胚胎基本上不發生免疫排斥反應

點評 本題結合流程圖，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的概念、原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節，能正確分析題圖，再結合所學的知識準確答題．