Question

【題目】某地土壤中有一種有害的、難以降解的有機化合物A，研究人員從該地土壤中篩選獲得了一種只能降解、利用化合物A的細菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，①為土壤樣品。請回答下列問題：

（1）實驗室常用的滅菌方法有_____________、_____________和高壓蒸汽滅菌。

（2）②中用于培養目的菌株的選擇培養基中應加入化合物A作為唯一__________。

（3）測定②中活細菌的數量，常采用__________法。在某一次實驗中，平板上菌落平均數為36個／平板，與血細胞計數板計數法相比，此計數方法測得的細菌菌落數較__________。在6個細菌培養基平板上，均接種稀釋倍數為105的土壤樣品液0．1 mL，培養一段時間后，平板上長出的細菌菌落數分別為13、156、462、178、175和191，則每毫升土壤樣品中的細菌數量為__________。

（4）④作為對照，該細菌在④中不生長，在⑤中生長，④與⑤的培養基的主要區別在于_____。

Answer 1

【答案】灼燒滅菌 干熱滅菌 碳源 稀釋涂布平板 少 1.7 5×108 ④的培養基中沒有加入化合物A作為碳源，而⑤的培養基中加入了化合物A作為碳源

【解析】

本題考查微生物培養和篩選方法。微生物的培養需要在無菌條件下進行。常用滅菌方法如下：

1、灼燒滅菌，將微生物的接種工具，如接種環、接種針或其他的金屬用具直接在酒精燈火焰的充分燃燒層燃燒，可以迅速的徹底地滅菌。

2、干熱滅菌，將滅菌物品放入干熱滅菌箱內在160-170度加熱1-2小時可以達到滅菌的目的。

3、高壓蒸汽滅菌將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內進行滅菌的方法。

4、實驗室內常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。兩種方法都可以獲得單菌落，但后者還可以進行活菌計數。

（1）實驗室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌它們分別適用于不同的實驗器材。

（2）因為要篩選只能降解、利用化合物A的細菌，所以要求選擇培養基中只加入化合物A作為唯一碳源。

（3）結合題干實驗過程可知，活菌計數法通常采取了稀釋涂布平板法。該方法與血球計數法相比結果偏小，因為后者把死的菌體也即入其中。在6個細菌培養基平板上接種并培養一段時間后，平板上長出的細菌菌落數只有156、178、175和191四個平板符合計數要求，所以每克土壤樣品中的細菌數量=（156+178+191+175）÷4÷0.1×105=1.75×108個。

（4）④作為對照，該細菌在④中不生長，在⑤中生長，④與⑤的培養基的主要區別在于④的培養基中沒有加入化合物A作為碳源，而⑤的培養基中加入了化合物A作為碳源。用這種方法可以檢驗獲得的菌種是否符合要求。