Question

【題目】如圖是制備抗埃博拉病毒(EBOV)VP40蛋白單克隆抗體的過程，請據圖回答問題：

(1)通過PCR技術獲取目的基因的過程中，反應體系中除了加入含有EBOV VP40基因的DNA、dNTP，還應該有___________酶和根據目的基因的核苷酸序列設計的_____________。

(2)選用EcoRⅠ和XhoⅠ雙酶切的優點是____________________________。

(3)大腸桿菌獲得重組質粒A，從而發生穩定遺傳變化的過程可稱為________。該過程首先需要用________處理大腸桿菌，使其更易吸收環境中的DNA分子。

(4)過程⑥常用的不同于誘導植物原生質體融合的方法是用___________處理，該過程能產生的兩兩融合的細胞有_______種。若把在HAT選擇培養基上存活的細胞全部培養在同一培養基中，從中提取出的抗體_________(填“是”或“不是”)單克隆抗體。

(5)體內培養是指把能產生特異性抗體的雜交瘤細胞注射到小鼠腹腔內進行培養，一段時間后，從__________中提取單克隆抗體。圖示過程應用了哪些生物技術：__________________________。

Answer 1

【答案】Taq(熱穩定的DNA聚合) 引物 防止酶切產物之間的隨意連接，提高連接成功率(其他合理答案也可) 轉化 Ca2+ 滅活的病毒 3 不是 腹水 基因工程、動物細胞培養、動物細胞融合

【解析】

1、圖示過程中，①為獲取目的基因，②為形成重組質粒，③為目的基因的導入，④為獲取相應的蛋白質，⑤為注射入B淋巴細胞，⑥為形成雜交瘤細胞，⑦為獲取單克隆抗體。

2、PCR技術的過程：高溫變性、低溫復性、中溫延伸，條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩定DNA聚合酶(Taq酶)。

3、獲得目的基因的方法：①從基因文庫中獲取②利用PCR技術擴增③人工合成 (化學合成)。原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成。

4、DNA重組技術至少需要三種工具：限制性核酸內切酶(限制酶) 、DNA連接酶、運載體.

5、動物細胞融合原理是：細胞增殖、細胞膜的流動性；細胞融合的方法有：物理法：離心、振動、電激；化學法：聚乙二醇；生物法：滅活的病毒(滅活的仙臺病毒) 。最廣泛的應用是：制備單克隆抗體，一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體，從血清中分離出的抗體產量低、純度低、特異性差。

(1)PCR擴增目的基因需要熱穩定的DNA聚合酶和引物。

(2)EcoRⅠ和XhoⅠ切割形成的黏性末端不同，而DNA連接酶只能將具有相同黏性末端的DNA片段連接起來，因此為了防止目的基因反向連接或自身環化，酶切時可同時選用EcoRⅠ和XhoⅠ，提高連接成功率。

(3)大腸桿菌獲得重組質粒，從而發生穩定遺傳變化的過程可稱為轉化，將目的基因導入細菌的過程中首先需要用Ca2+處理大腸桿菌，使其更易吸收環境中的DNA分子。

(4)不同于誘導植物原生質體融合的誘導動物細胞融合的方法是用滅活的病毒處理。兩種細胞(分別用A細胞、B細胞表示)兩兩融合得到A—A、A—B、B—B三種融合細胞，選擇培養基上的雜交瘤細胞可產生多種抗體，因此產生的抗體不是單克隆抗體。

(5)將能產生特異性抗體的雜交瘤細胞注射到小鼠腹腔內進行培養，一段時間后，可從腹水中提取單克隆抗體。題圖示過程應用了基因工程、動物細胞培養、動物細胞融合等生物技術。