Question

【題目】某質粒上有SalⅠ、Hind Ⅲ、BamHⅠ三種限制酶切割位點，同時還含有抗四環素基因和抗氨芐青霉素基因。利用此質粒獲得轉基因抗鹽煙草的過程如圖所示，請回答下列問題。

（1）在構建重組質粒時，應選用兩種限制酶對進行切割，然后進行連接，以保證重組DNA序列的唯一性。
（2）為篩選出導入了重組質粒的農桿菌，應在培養基中加入 ， 理由是。
（3）將轉入抗鹽基因的煙草細胞培育成完整的植株需要用技術，即通過
和兩個主要過程最終形成完整植株，此過程除營養物質外還必須向培養基中添加。

Answer 1

【答案】
（1）SalⅠ和HindⅢ；質粒和抗鹽基因的DNA
（2）氨芐青霉素；重組質粒中含抗氨芐青霉素基因而抗四環素基因被破壞
（3）植物組織培養；脫分化；再分化；植物激素(植物生長調節劑或生長素和細胞分裂素)
【解析】（1）在構建重組質粒時，應保證質粒中的標記基因至少保留一個不被破壞，且切割后質粒與目的基因具有2的末端，還要避免質粒自身相連，所以應選用SalⅠ和HindⅢ兩種限制酶對質粒和抗鹽基因的DNA進行切割，然后進行連接，以保證重組DNA序列的唯一性。（2）為篩選出導入了重組質粒的農桿菌 ，應在培養基中加入氨芐青霉素，理由是重組質粒中含抗氨芐青霉素基因而抗四環素基因被破壞。（3）將轉入抗鹽基因的煙草細胞培育成完整的植株需要用植物組織培養技術，即通過脫分化和再分化兩個主要過程最終形成完整植株，此過程除營養物質外還必須向培養基中添加植物生長調節劑或生長素和細胞分裂素，以誘導再分化的方向。
【考點精析】認真審題，首先需要了解基因工程的原理及技術(基因工程的原理是利用DNA重組技術)．