Question

【題目】下表是某種微生物培養基的配方表，回答：

牛肉膏	蛋白胨	NaCl	瓊脂	水
0．5g	1g	0．5g	2g	200mL

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（1）此培養基的營養成分有五類，其中蛋白胨提供的營養物質是__________。

（2）在培養基制備過程中，各種成分溶化后分裝前，必須的操作是_______________。

（3）微生物培養最基本的要求是無菌操作。液體培養基應選用的滅菌方法是______________（填“高壓蒸汽滅菌”或“干熱滅菌”），不選另外一種的原因是_________________________。巴氏消毒法與煮沸消毒法相比，其優點是_________________。

（4）用稀釋涂布平板法統計菌落數目時，最好選擇群落在_________的平板進行計數。若統計出在一稀釋倍數為105的平板上的平均菌落數為30個，所用稀釋液的體積為0．2mL，則每毫升樣品中的細菌數為_________。

（5）純化菌株時，通常使用的劃線工具是_________。劃線的某個平板培養后，第一劃線區域的劃線上都不間斷地長滿了菌，第二劃線區域的第一條線上無菌落，其它劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤有________。

Answer 1

【答案】碳源、氮源、維生素??? 調節pH??? 高壓蒸汽滅菌??? 干熱滅菌法針對耐高溫需要保持干燥的物品，若選干熱滅菌法會使培養基中的水分蒸發??? 達到消毒目的的同時，營養物質損失較少??? 30～300??? 1.5×107??? 接種環??? 接種環灼燒后未冷卻；劃線未從第一區域末端開始???

【解析】

1、培養基的成分包括碳源、氮源、水、無機鹽和生長因子。

2、制備牛肉膏蛋白胨培養基的步驟為：計算→稱量→溶化→調pH→滅菌→倒平板。

3、消毒和滅菌：

①消毒是指使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內部一部分對人體有害的微生物。常見消毒方法有煮沸消毒、化學藥物消毒、紫外線消毒等。

②滅菌是指使用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子。實驗室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。

4、微生物常見的接種的方法：

①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落。

（1）微生物培養基的成分包括碳源、氮源、水、無機鹽和生長因子。蛋白胨在培養基可以為微生物提供碳源、氮源和維生素。

（2）配制培養基時為保證無菌，各種成分在溶化后分裝前必須進行調節pH，然后再滅菌。

（3）液體培養基常用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌，而干熱滅菌法主要針對耐高溫需要保持干燥的物品，若選干熱滅菌法會使培養基中的水分蒸發；與煮沸消毒法相比，巴氏消毒法在較低溫度下，既可以殺死病菌，又能保持物品中營養物質損失較少和風味不變。

（4）使用稀釋涂布平板法統計活菌數目時，為了保證結果準確，一般選擇菌落數在30～300的平板進行計數。若統計出在稀釋倍數為105的平板上的平均菌落數為30個，所用稀釋液的體積為0.2mL，則每毫升樣品中的細菌數為30÷0.2×105=1.5×107個。

（5）純化菌株時，通常使用的劃線工具是接種環。劃線的某個平板培養后，第一劃線區域的劃線上都不間斷地長滿了菌，第二劃線區域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤有：接種環灼燒后未冷卻，將菌種殺死；劃線未從第一區域末端開始。