Question

【題目】如圖是基因文庫的構建示意圖。請回答下列問題。

（1）獲取目的基因時，如果目的基因的_________是未知的，可以建立一個包括目的基因在內的基因文庫，再從基因文庫中獲得目的基因。對于高等動植物復雜的染色體DNA來說，單個基因所占比例極小，將其分離出來并非易事，一般需要先對DNA進行_________。以產生足夠多的數量。

（2）如圖所示基因文庫用克隆載體構建，載體中目的基因可通過細菌的___________完成片段的克隆。從基因文庫中分離目的基因時主要利用核酸探針，核酸探針在基因工程的操作過程中還有很多方面的應用，如：檢測目的基因是否導入到受體細胞，以及_________。

（3）培育轉基因羊時，可利用顯微注射法將基因文庫中獲得的目的基因導入_____（受體）細胞，再經過___________后，移植到___________的發情母畜的輸卵管或子宮角。目的基因在受體細胞中的整合率不太穩定，這除了與注射的位置和時間有關外，還要考慮目的基因的構型和__________。

Answer 1

【答案】核苷酸序列 擴增 繁殖 ①檢測目的基因是否插入到受體細胞的染色體DNA中；②檢測目的基因是否轉錄出mRNA外（答對1點即可） 受精卵 胚胎體外培養 未經配種 濃度

【解析】

基因工程技術的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）目的基因的獲取方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成法。如果目的基因的核苷酸序列未知，可以構建基因文庫，從基因文庫中獲取目的基因。要產生足夠多的DNA片段可以采取PCR擴增技術。

（2）構建基因文庫的過程中，基因表達載體中目的基因可通過細菌的繁殖完成片段的克隆。核酸探針在基因工程的操作過程中可以用于目的基因的檢測和鑒定，如檢測目的基因是否導入到受體細胞，以及檢測目的基因是否插入到受體細胞的染色體DNA中；檢測目的基因是否轉錄出mRNA。

（3）將目的基因導入動物細胞時一般選擇動物的受精卵細胞作為受體，再經過早期體外胚胎培養后，移植到未經配種的發情母畜的輸卵管或子宮角。目的基因在受體細胞中的整合率注射的位置和時間有關，除外還要考慮目的基因的構型和濃度的影響。