Question

【題目】研究人員利用小鼠（2N=40）的單倍體ES細胞（只有一個染色體組），成功培育出轉基因小鼠，其主要技術流程如圖所示：
注：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ代表四種限制酶，箭頭指向的位置為限制酶的切割位置；Amp′是氨芐青霉素抗性基因，Neo′是G418抗性基因．
（1）重組質粒上的抗生素抗性基因可作為 ， 其作用是有利于篩選出含有目的基因的細胞，氨芐青霉素不能有效殺死小鼠細胞，而一定濃度的G418能有效殺死不具有Neo′的小鼠細胞，結合如圖推測，過程①選用的2種限制酶是 （選填圖中的編號），圖中③處的培養液應添加（填“氨芐青霉素”或“G418”）．
（2）若圖中過程①選用的2種限制酶識別序列和切割位置分別是 和 ，則經這兩種限制酶切割后所產生的黏性末端是 ， 此時，圖中過程②應選用（填“EcoliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）．
（3）據圖分析，細胞乙內除線粒體DNA外，還有個DNA分子；細胞乙發育成桑椹胚的過程中細胞分裂方式是 ， 將細胞乙培養成桑椹胚的技術稱為技術．

Answer 1

【答案】
（1）標記基因；Ⅰ和Ⅱ；G418
（2）；T4DNA連接酶
（3）40；有絲分裂；早期胚胎培養
【解析】解：（1）重組質粒上的抗生素抗性基因可作為標記基因，其作用是有利于篩選出含有目的基因的細胞．根據題意可知，氨芐青霉素不能有效殺死小鼠細胞，而一定濃度的G418能有效殺死不具有Neo′的小鼠細胞，因此應選擇Neo′作為標記基因，即質粒上Neo′不能用限制酶切割，則過程①應選用Ⅰ和Ⅱ2種限制酶，圖中③處的培養液應添加G418．（2）若圖中過程①選用的2種限制酶識別序列和切割位置分別是 和 ，前者被限制酶切割形成的是黏性末端，后者被限制酶切割形成的是平末端，即經這兩種限制酶切割后所產生的黏性末端是 ，此時，圖中過程②應選用T4DNA連接酶．（3）根據題意可知，小鼠的染色體為2N=40，因此單倍體ES細胞的細胞核中染色體有20條，完成減數分裂后的卵細胞中也有20條染色體，即細胞乙內除線粒體DNA外，細胞核中有40個DNA分子；細胞乙發育成桑椹胚的過程中細胞分裂方式是有絲分裂，將細胞乙培養成桑椹胚的技術稱為早期胚胎培養技術． 所以答案是：（1）標記基因Ⅰ和ⅡG418（2）

T4DNA連接酶（3）40 有絲分裂 早期胚胎培養
【考點精析】掌握基因工程的原理及技術是解答本題的根本，需要知道基因工程的原理是利用DNA重組技術．