Question

【題目】從自然界篩選嗜鹽菌的一般步驟是：采集菌樣→富集培養→純種分離→性能測定。

（1）培養嗜鹽菌的菌樣應從____________環境采集。

（2）富集培養指創設僅適合待分離微生物旺盛生長的特定環境條件，使其在群落中的數量大大增加，從而分離出所需微生物的培養方法。對嗜鹽產淀粉酶微生物的富集培養應選擇以________為唯一碳源的培養基，并在高鹽條件下培養。在富集培養過程中，需將錐形瓶放在搖床上振蕩，一方面使菌株與培養液充分接觸，提高營養物質的利用率；另一方面能__________。

（3）下面兩圖是采用純化微生物培養的兩種接種方法接種后培養的效果圖解，請分析接種的具體方法。

獲得圖A效果的接種方法是___________。獲得圖B效果的接種方法是__________，利用A的方法在5個平板上各接種稀釋倍數為103的菌液樣品（涂布體積為0.2mL），培養一段時間后，平板上的菌落數分別為96、100、108、112、430，則每升原菌液樣品中細菌數為___________

（4）采用固體平板培養細菌時要倒置培養的目的是____________________________。

Answer 1

【答案】高鹽 淀粉 增加培養液中的溶氧量 稀釋涂布平板法 平板劃線法 5.2×108 防止冷凝后形成的水珠滴落在培養基上污染培養基（或避免培養基中水分的過快揮發）

【解析】

1、微生物常見的接種的方法①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落；②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落。

2、統計菌落數目的方法（1）顯微鏡直接計數法①原理：利用特定細菌計數板或血細胞計數板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數量；②方法：用計數板計數； ③缺點：不能區分死菌與活菌。（2）間接計數法（活菌計數法）①原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。②操作a、設置重復組，增強實驗的說服力與準確性；b、為了保證結果準確，一般選擇菌落數在30～300的平板進行計數；③計算公式：每克樣品中的菌株數=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數。

（1）不同微生物的生存環境不同，獲得理想微生物的第一步是從適合的環境采集菌樣，然后再按一定的方法分離、純化。噬鹽菌的菌樣應從高鹽環境采集，如高鹽海灘等。

（2）根據要求，對產耐高溫淀粉酶微生物的富集培養應選擇以淀粉為唯一碳源的培養基，并在高溫條件下培養。培養過程中，需將錐形瓶放在搖床上振蕩，目的有兩個，一方面使菌株與培養液充分接觸，提高營養物質的利用率；另一方面能增加培養液中的溶氧量。

（3）圖A菌落分布較均勻 接種方法是稀釋涂布平板，圖B菌落集中呈線狀，接種方法是平板劃線法平板中菌落數在30-300以內進行計數，故每升原菌液樣品中細菌數為：（96+100+108+112）÷4÷0.2×103×103=5.2×108。

（4）防止冷凝后形成的水珠滴落在培養基上污染培養基（或避免培養基中水分的過快揮發），故固體平板培養細菌時要倒置培養。