Question

2008年諾貝爾化學獎授予了三位在研究綠色熒光蛋白(GFP)方面做出突出貢獻的科學家。綠色熒光蛋白能在藍光或紫外光的激發下發出熒光，這樣借助GFP發出的熒光就可以跟蹤蛋白質在細胞內部的移動情況，幫助推斷蛋白質的功能。我國首例綠色熒光蛋白轉基因克隆豬在東北農業大學的種豬場自然分娩產出，這標志著我國在轉基因克隆豬技術領域已達到世界領先水平。下圖為我國首例綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程示意圖，請據圖回答：

（1）圖中通過過程①、②形成重組質粒，需要限制性內切酶切取目的基因、切割質粒。若限制性內切酶Ⅰ的識別序列和切點是一G↓GATCC一，限制性內切酶Ⅱ的識別序列和切點是—↓GATC一。在質粒上有酶I的一個切點，在目的基因的兩側各有1個酶Ⅱ的切點。

①請畫出質粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端。

②在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接起來? ＿＿＿＿＿。理由是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

（2）GFP基因與目的基因一起構建到載體上不影響目的基因的表達，也不影響由目的基因控制合成的蛋白質的結構與功能,且對細胞無毒性作用，因此GFP基因可以運用作為基因表達載體上的＿＿＿＿＿＿。

（3）過程③將重組質粒導入豬胎兒成纖維細胞時，采用最多也最有效的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。然后還要通過＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿技術來檢測綠色熒光蛋白基因是否已重組到豬胎兒成纖維細胞的染色體DNA上。

（4）為了獲得更多的豬卵母細胞，可通過對母豬注射＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的方法，做超數排卵處理，并將所采集到的卵母細胞在體外培養到＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿期即可通過顯微操作將其細胞核去除。

（5）早期胚胎的培養液成分較復雜，除一些無機鹽和有機鹽類外，還需添加維生素、激素、＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿等物質。

（6）綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程屬于＿＿＿＿＿＿生殖。目前科學家們通過蛋白質工程制造出了藍色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質工程技術制造出藍色熒光蛋白過程的正確順序是：＿＿＿＿＿＿(用數字表示)。

①推測藍色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列

②藍色熒光蛋白的功能分析和結構設計

③藍色熒光蛋白基因的修飾(合成)

④表達出藍色熒光蛋白

Answer 1

(1) ①如圖：

②可以連接；因為由兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互補的）；

(2)標記基因；

(3)顯微注射技術；DNA分子雜交；

(4)促性腺激素；減數第二次分裂中期；

(5)氨基酸、核苷酸、血清；

(6)無性；②①③④