Question

【題目】科學家將擬南芥的抗寒基因(CBFl)轉入香蕉以獲得抗寒的香蕉品種。如圖是某質粒載體上的SacⅠ、XbaⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ四種限制酶的切割位點示意圖。請據圖回答：

（1）為構建基因表達載體，用限制酶SacⅠ、XbaⅠ切割含目的基因的DNA片段獲得了CBFl基因，同時要用限制酶__對質粒載體進行切割，目的是__，這種采用雙酶切的方法構建基因表達載體的優(yōu)點是使目的基因與載體__，并能防止目的基因或載體的自身環(huán)化。

（2）將CBFl基因連接到圖示質粒后，作為基因表達載體，其組成還必須有__，將重組質粒導入香蕉細胞最常用的方法是__。

（3）為了鑒別受體細胞中是否含有CBFl基因，可用含__的培養(yǎng)基進行篩選。

（4）科學家將生長健壯、苗齡一致的轉基因香蕉(實驗組)與非轉基因香蕉(對照組)進行____處理，鑒定兩組之間的抗寒性差異，如果__，則說明獲得了抗寒的香蕉優(yōu)質品種。

Answer 1

【答案】SacⅠ、XbaⅠ 獲得相同的（黏性）末端 定向連接 啟動子和終止子 農桿菌轉化法 氨芐青霉素 低溫 實驗組的抗寒能力明顯高于對照組

【解析】

在構建基因表達載體中，如果目的基因和載體用同一種限制酶切割，獲得的黏性末端相同，將會發(fā)生自身環(huán)化現象，故應選用不同的限制酶分別對目的基因和載體切割，以獲得不同的黏性末端。將目的基因導入植物細胞常用的方法是農桿菌轉化法，導入動物細胞常用的方法是顯微注射法。

（1）構建基因表達載體時，應該用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA和運載體，因此為構建基因表達載體，用SacI、XbaI切下CBFl基因后，對質粒載體進行切割的限制酶也是SacI、XbaI，這樣可以產生相應的黏性末端，便于DNA連接酶將目的基因與運載體定向連接形成重組DNA，并能防止目的基因或載體的自身環(huán)化。

（2）基因表達載體的組成包括啟動子、終止子、標記基因、目的基因等。CBFl基因為目的基因，圖中質粒上含標記基因，故作為基因表達載體，其組成還必須有啟動子和終止子。香蕉細胞是植物細胞，將目的基因導入植物細胞常用農桿菌轉化法。
（3）據圖分析，質粒上的標記基因是氨芐青霉素抗性基因，所以為了鑒別受體細胞中是否含有CBF1基因，可用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基進行篩選。
（4）根據題干信息可知，目的基因是抗寒基因，所以科學家將生長健壯、苗齡一致的轉基因香蕉（實驗組）與非轉基因香蕉（對照組）進行低溫處理。比較兩組之間的抗寒性差異。如果實驗組的抗寒能力明顯高于對照組，則說明獲得了抗寒的香蕉優(yōu)質品種。