Question

下圖是將人的生長激素基因導人細菌細胞B制造工程菌的示意圖。已知細菌細胞B不含質粒A，也不含質粒A上的基因。質粒A導人細菌細胞B后，其上的基因能得到表達。請回答下列問題

（1）目的基因可通過PCR技術獲取，這一技術中需要的酶是              。

（2）將目的基因與質粒結合形成重組質粒的過程中，需要的工具酶有          。

（3）若要檢測目的基因是否導人，可在培養細菌B的培養基中加入         （氨卞青霉素／四環素），若在培養基上觀察到大量細菌B的菌落，表明目的基因已成功導  人細菌B，此時所用的培養基屬于            培養基（按用途分）。

（4）若要比較準確地了解轉化率，一般可通過統計菌落的數目來推測活菌數目，還可以通過         的方法統計活菌數目；前者統計的活菌數目比實際的數目       （多／少／一樣），原因是         。為了保證統計數目的準確，還應該設計         。

Answer 1

（1）耐高溫的DNA聚合酶

（2）防制性核酸內切酶、DNA連接酶

（3）四環素  選擇

（4）顯微鏡直接計數  少  當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落  對照實驗

解析:

考查基因工程的操作方法、過程的識圖分析與有關實驗操作的設計評價。（1）基因工程中，獲取目的基因的方法有從基因文庫中獲得、從部分基因文庫中獲得、人工合成法以及用PCR技術擴增目的基因，在PCR技術擴增目的基因是在生物體外的高溫環境下進行的，所以必須耐高溫的DNA聚合酶；

（2）將目的基因與質粒結合構建重組質粒時，必須用相同的限制酶切割目的基因和質粒以獲得相同的粘性末端，同時還必須借助于DNA連接酶，將二者黏合；

（3）由于目的基因的導入，使四環素的抗性基因破壞，因此，重組質粒不在具有康四環素的性狀表達，只有康氨芐青霉素的性狀作為標記性狀，加入氨芐青霉素的培養基具有選擇作用，因此屬于選擇性培養基；

（4）除應用活菌落計數外，還可借助血細胞計數板用顯微鏡直接計數，活細胞計數法獲得的細菌數目比顯微鏡直接計數法獲得數目少，因為顯微鏡下計數的的細菌數目既有活細菌、又有死細菌，因此，為保證計數準確，必須設置對照試驗，以減少實驗誤差。