Question

19．利用轉基因山羊乳腺生物反應器可生產人促紅細胞生成素（EPO），獲得轉基因山羊的過程如下圖．請據圖回答下列問題：

（1）在已知EPO基因的上游和下游堿基序列的前提下，過程①獲取目的基因的方法為PCR擴增．
（2）在過程②中，應用同一種限制酶切割目的基因和質粒，使其具有相同的黏性末端．EPO基因表達載體上要具備啟動子和終止子等調控元件，以便完成EPO基因的轉錄．
（3）在過程③中，用顯微注射法法將EPO表達載體移入雄原核中．在過程⑤前，需對囊胚期的細胞進行鑒定：一是用抗原-抗體雜交法鑒定EPO基因表達產物；二是用DNA分析法鑒定囊胚的性別，選用雌性胚胎．
（4）為獲得更多轉基因山羊，一方面可對供體母山羊注射促性腺激素促進超數排卵．
另一方面，可對早期胚胎進行分割移植，胚胎分割的關鍵是將內細胞團均分．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是獲得轉基因山羊的過程圖，其中①表示獲取目的基因的過程；②表示基因表達載體的構建過程；③表示將目的基因導入受體細胞的過程；④表示早期胚胎培養過程；⑤表示胚胎移植過程．

解答 解：（1）利用PCR技術獲取目的基因的前提條件是要有一段已知目的基因的核苷酸序列．因此，在已知EPO基因的上游和下游堿基序列的前提下，可以合成一對引物，此時宜采用PCR技術獲取目的基因．
（2）②表示基因表達載體的構建過程，該過程中首先要用同一種限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體，以便產生相同的黏性末端，其次用DNA連接酶將目的基因和運載體連接形成重組DNA分子．基因表達載體的組成包括啟動子、目的基因、標記基因和終止，其中啟動子是RNA聚合酶的結合位點，終止子是轉錄終止的部位，因此EPO基因上要具備啟動子和終止子等調控元件，以便完成EPO基因的轉錄．
（3）③是將目的基因導入受體細胞的過程，若受體細胞是動物細胞，則采用顯微注射法．基因表達產物是蛋白質，因此要鑒定EPO基因表達產物可采用抗原-抗體雜交法；鑒定囊胚的性別可取滋養層細胞進行DNA分析．
（4）為獲得更多轉基因山羊，一方面可對供體母山羊注射促性腺激素促進超數排卵．另一方面，可對早期胚胎進行分割移植，胚胎分割的關鍵是將內細胞團均分，否則會影響分割后胚胎的恢復和進一步發育．
故答案為：
（1）PCR擴增
（2）同一種限制酶    啟動子和終止子
（3）顯微注射法    抗原-抗體雜交     DNA分析
（4）促性腺激素   將內細胞團均分

點評 本題結合轉基因山羊的培育過程圖，考查基因工程和胚胎工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節；識記胚胎分割的特點及相關應用，能結合圖中信息準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．