Question

【題目】閱讀相關信息，完成微生物的培養及應用。

（1）將馬鈴薯去皮切塊，加水煮沸一定時間，過濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入一定量蔗糖和瓊脂，用水定容后滅菌，得到M培養基。回答下列問題：

①M培養基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長提供了多種營養物質，營養物質類型除氮源外還有___________（答出兩點即可）。氮源進入細菌后，可參與合成的生物大分子有___________（答出兩點即可）。

②若在M培養基中用淀粉取代蔗糖，接種土壤濾液并培養，平板上長出菌落后可通過加入顯色劑篩選出能產生淀粉酶的微生物，加入的顯色劑是___________，該方法能篩選出產生淀粉酶微生物的原理___________。

（2）有些細菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學欲從受原油污染的土壤中篩選出高效降解原油的菌株。回答問題：

①在篩選過程中，應將土壤樣品稀釋液接種于以________________為唯一碳源的固體培養基土，從功能上講，該培養基屬于___________培養基。

②純化菌種時，若要以該固體培養基培養目標菌并對菌落進行計數，接種時，應采用的方法是______________。該方法統計的菌落數往往比實際數目_________，這是因為_________。

Answer 1

【答案】碳源、無機鹽 蛋白質、核酸 碘液 淀粉遇碘顯藍色，產淀粉酶菌落周圍淀粉被水解，形成透明圈 原油 選擇 稀釋涂布平板法 少 當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察得到的只是一個菌落

【解析】

1.測定培養液中微生物的數目，可采用顯微鏡直接計數(或血細胞計數板計數)法對培養液中的微生物直接計數，也可用稀釋涂布平板法將微生物接種于滅菌后的固體培養基上，培養一段時間后，通過計數菌落數目計算培養液中微生物的數目。由于采用第一種方法計數時不能剔除死菌，采用第二種方法計數時，當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，所以第一種方法統計的數目比實際活菌數目高，第二種方法統計的數目比實際活菌數目低。

2.選擇培養基是指一類根據特定微生物的特殊營養要求或其對某理化因素抗性的原理而設計的培養基。具有只允許特定的微生物生長，而同時抑制或阻止其他微生物生長的功能。

（1）①微生物所需的營養物質有：碳源、氮源、水、無機鹽等。而馬鈴薯浸出液能為微生物生長提供多種營養物質如氮源、碳源、無機鹽等。生物體內的有機物中，蛋白質主要由C、H、O、N組成，部分含有P、S；核酸由C、H、O、N、P組成；磷脂由C、H、O、N、P組成，因此，氮源進入細胞后，可以參與合成蛋白質、核酸、磷脂等。

②淀粉遇碘液變藍色，能產生淀粉酶的微生物可以分解細胞周圍的淀粉，存在透明圈，從而容易篩選出產淀粉酶的微生物，因此為了篩選出分解淀粉的微生物，可在M培養基中用淀粉取代蔗糖，然后加入碘液為顯色劑，接種土壤浸出液后進行培養，然后選擇有透明圈的菌落即可。

（2）①在篩選過程中，應將從富含原油的地方獲得的土壤樣品稀釋液接種于以原油為唯一碳源的固體培養基上，在該培養基上只有能夠利用原油的微生物能夠生長，而其他的微生物被抑制生長，因此，從功能上講，該培養基屬于選擇培養基。

②因為不僅要對目標菌進行純化，而且還有計數，因此需要采用稀釋涂布平板法進行接種。用該方法統計時，當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察得到的只是一個菌落，因此在計數菌落時，往往比實際數目偏小。