Question

【題目】科學家把編碼霍亂毒素的無毒性β鏈基因轉移到苜蓿細胞后培育出轉基因苜蓿。其具體過程如下：

（1）構建重組DNA分子常用的工具酶是____________和____________。

（2）圖中過程②采用的方法是____________，Ti質粒的T—DNA上有一個tms片段能促進生長素的大量合成，在對Ti質粒改造時____________（填“應該”或“不應該”）將該片段去除。

（3）該實驗中將農桿菌轉入苜蓿細胞的原生質體后，需再生細胞壁。請從理論上提出兩種實驗室檢測原生質體是否再生出細胞壁的方法：①________________________；②________________________。

（4）把含有目的基因的苜蓿細胞培養成幼苗時，細胞先后經過__________、__________兩個重要階段。

Answer 1

【答案】 限制酶 DNA連接酶 農桿菌轉化法 應該 將細胞置于高滲溶液中，用顯微鏡觀察是否發生質壁分離 將細胞置于清水中，用顯微鏡觀察是否破碎 脫分化 再分化

【解析】試題分析：本題考查基因工程、細胞工程、質壁分離實驗，考查對基因工程操作步驟、組織培養過程、質壁分離實驗的理解和應用。解答此題，可根據質壁分離的原理檢測原生質體是否再生出細胞壁。

（1）構建重組DNA分子需要用同種限制酶切割目的基因和質粒，并用DNA連接酶進行鏈接。

（2）圖中過程②采用的方法是培育轉基因植物常用的農桿菌轉化法，在對Ti質粒改造時應該將T—DNA上促進生長素大量合成的tms片段去除，避免T—DNA進入受體細胞后引起細胞快速分裂和生長，形成腫瘤。

（3）細胞壁對植物細胞具有支持和保護作用，檢測原生質體是否再生出細胞壁，一種方法是將細胞置于高滲溶液中，用顯微鏡觀察細胞是否因失水導致質壁分離，另一種方法是將細胞置于清水中，用顯微鏡觀察細胞是否因大量吸水而漲破。

（4）含有目的基因的苜蓿細胞在組織培養過程中先后經過脫分化和再分化兩個階段，最后發育為幼苗。