Question

【題目】自然界中有很多種微生物，尚未能分離純化培養，科研人員開發了新的微生物分離技術以篩選微生物。

（1）配制培養基并分離微生物的步驟是：計算→稱量→溶化→調pH→滅菌→倒平板→_______→培養。篩選微生物的一般思路是，根據表型特征利用_______培養基進行篩選。

（2）若某種微生物沒有明顯表型特征時，就無法通過上述方法篩選，科研人員通過圖1所示的流程進行篩選。

①據圖分析，科研人員利用目標微生物的基因獲取大量膜蛋白，需要構建_______，并導入用________處理的大腸桿菌細胞中。

②利用兔子制備單克隆抗體時，第一次篩選獲得多種_______，第二次篩選利用_______原理篩選得到分泌抗膜蛋白抗體的雜交瘤細胞，進行克隆培養。 用目的微生物的膜蛋白而不是胞內蛋白作為抗原的原因_______。

（3）將上述帶有熒光的單克隆抗體與待分離微生物群體混合，用流式細胞儀分離不同熒光強度的細胞，結果如圖2所示。對結果進行比較，應從區域_______（選填圖中數字）的細胞中篩選目標微生物。

Answer 1

【答案】接種 選擇 基因表達載體 Ca2+ 雜交瘤 抗原-抗體雜交 制備的單克隆抗體可以與微生物表面的膜蛋白結合，便于標記微生物 ②

【解析】

單克隆抗體的制備過程：首先用特定抗原注射到小鼠體內，使其發生免疫，小鼠體內產生具有免疫能力的B淋巴細胞。利用動物細胞融合技術將B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合，并篩選雜交瘤細胞。單克隆抗體制備過程中的兩次篩選：第一次篩選：利用特定選擇培養基篩選，獲得雜交瘤細胞，即AB型細胞（A為B淋巴細胞，B為骨髓瘤細胞），淘汰不需要的A、B、AA、BB型細胞。第二次篩選：利用多孔板法和抗原-抗體雜交法篩選，獲得產生特定抗體的雜交瘤細胞。最終篩選獲得的雜交瘤細胞的特點是能無限增殖并能分泌特異性抗體，最后從培養液或小鼠腹水中提取單克隆抗體。

（1）制備固體平板培養基的主要操作步驟是：計算→稱量→溶化→調pH→滅菌→倒平板→接種→培養。選擇培養基可以抑制其它微生物生長，而有利于目的菌的生長，所以篩選微生物一般使用選擇培養基。

（2）①據圖分析，科研人員利用基因工程將目標微生物編碼膜蛋白的基因序列，構建基因表達載體，并導入用CaCl2處理的大腸桿菌細胞中，使目的基因增殖并表達可獲取大量膜蛋白。

②根據上述分析可知，制備單克隆抗體時，第一次篩選獲得多種雜交瘤，第二次篩選利用抗原-抗體雜交原理篩選得到分泌抗膜蛋白抗體的雜交瘤細胞，進行克隆培養。用目的微生物的膜蛋白而不是胞內蛋白作為抗原的原因是制備的單克隆抗體可以與微生物表面的膜蛋白結合，便于標記微生物。

（3）利用抗體和抗原特異性結合的特性，可將上述帶有熒光的單克隆抗體與待分離微生物群體混合，目的是標記目標微生物。加入抗體后熒光性強的場所說明含有目標微生物多，所以據圖可知應從區域②的細胞中篩選目標微生物。