Question

（10分）圓褐固氮菌是自生固氮菌，為經濟有效地提高農作物產量，人們一直在努力研究、尋找固氮基因。對基因的研究常常因研究樣品中DNA含量太低而難以進行，PCR技術有效地解決了這個問題。如今對基因的深入研究使人類跨入了蛋白組研究時代，從復雜的細胞混合物中提取、分離高純度的蛋白質是該研究要做的基本工作之一。
（1）某同學在做微生物實驗時，不小心把圓褐固氮菌樣品和酵母菌樣品混在一起，已知青霉素會影響固氮菌的生長繁殖，但不影響真菌的生長繁殖。請填空完成分離這兩種菌的主要實驗步驟：
①分別配置               的培養基和            的培養基，分別分成兩份，依次標上A、a、B、b備用；
②分別向A、B培養基接種            ；
③把接種后的培養基放在恒溫箱中3d—4d；
④從A、B培養基上生長的      中挑取生長良好的菌株，分別接種到       中；
⑤                                 。
（2）用基因工程技術從經過分離、提純的圓褐固氮菌中獲取固氮基因，然后進行PCR擴增。下列表1和表2分別表示用PCR擴增固氮基因的反應體系及反應條件。

反應條件
	溫度	時間
變 性	95℃	30s
復 性	55℃	30s
延 伸	72℃	1min
30個循環后	適宜	5-10min
保 溫	4℃	2h

 

PCR反應體系	50ul
緩沖液	5ul
脫氧核苷酸	1ul
引物A	0.5ul
引物B	0.5ul
DNA聚合酶	0.5U
模板DNA	1-2ul
加去離子水補足至50 ul

①從上表中可得出，PCR技術與DNA復制相比較，主要區別之一是              。
此外，從反應條件看，所使用的DNA聚合酶應具有__________的特點。每次循環都需要2種引物的主要原因是_______________          ________________。

Answer 1

（1）①無氮（或不含氮和青霉素）    加青霉素（或加青霉素和氮）       
②混有兩種菌的樣品    ④菌落；    a、 b培養基  
⑤把接種后的培養基放在恒溫箱中3d—4d   
（2）①不需要ATP（或需要加入引物，或不需要解旋酶，或不需要DNA連接酶）；耐高溫；   DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈

解析