Question

研究人員利用基因工程技術對肺癌的治療進行了大量研究，肺部細胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發肺癌。研究人員利用基因工程技術將let-7基因導入肺癌細胞實現表達，發現肺癌細胞的增殖受到抑制。該基因工程技術基本流程如圖所示，據圖回答

1.在基因工程中通常選擇細菌質粒作為載體，原因是                          ；如果某質粒由100 0個脫氧核苷酸組成，脫氧核苷酸平均分子量為a,則該質粒的質量為        。

2.圖甲中在構建重組載體時，酶切目的基因和酶切質粒時，所用的限制酶可以不同，但是產生的粘性末端必須是                。

3.圖甲中在將酶切后的目的基因導入到酶切后的質粒上時需要的酶是              ， 圖乙中let-7基因轉錄過程需要的酶是    ，這 兩種酶作用的化學鍵都是          。

4.EcoR I限制酶只能識別序列一GAATTC一，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側各有1個EcoR I的切點，請畫出目的基因兩側被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端。                      

5.原代培養是是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養。原代培養隨著培養時間的延長和細胞不斷分裂，空間因素和營養因素會限制其進一步生長。此時就需要將培養物分割成小的部分（組織細胞分散開），重新接種到另外的培養器皿內再進行培養，這個過程就稱為傳代或者再培養。圖甲中進行傳代培養操作時，需要用　　 　　酶處理貼附在原代培養培養皿壁上的細胞，以利于傳代培養。

6.研究發現，let-7基因能影響RAS基因的表達，其影響機理如圖乙所示。從分子水平的角度分析，其作用機理是　　                               　    　。

7.下圖所示pBR322是目前常用的人工質粒載體。如果將BamHI處理后的pBR322質粒與用BgIⅡ處理得到的目的基因進行重組，并將重組質粒導入原本無amp^R和tet^R  的大腸桿菌進行培養。為了檢測重組質粒是否成功導入大腸桿菌，現將上述大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養基上培養，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環素的培養基上培養，得到如圖三的結果(空圈表示與圖二對照無菌落的位置)。與圖三空圈相對應的圖二中的菌落表現型是___       _____ ，圖三結果顯示，多數大腸桿菌內導入的是___            __。

 

Answer 1

【答案】

1.質粒進入受體細胞（宿主細胞）能穩妥保存并復制自己（有多個酶切位點，有標記基因）    1000a—18000

2.互補

3.DNA連接酶   RNA聚合酶    磷酸二酯鍵

4. 

 

5.（胰）蛋白酶

6.let-7轉錄的無翻譯功能的miRNA能與RAS mRNA特異性結合，抑制RAS蛋白質的合成

7.抗氨芐青霉素但不抗四環素    Pbr322Z質粒     （每格1分，共11分）

【解析】

試題分析：細菌質粒作為載體的原因是：１、能保存并復制自己２、有多個酶切位點３、有標記基因、４對宿主細胞無毒害作用；質粒的質量＝脫氧核苷酸的分子質量數－脫水分子質量數＝１０００ａ－１８*１０００；在構建重組的載體時，產生黏性末端必須得互補，才能連起來；把兩個基因縫合起來用ＤＮＡ連接酶，轉錄時用ＲＮＡ聚合酶，這兩種酶作用的部分是磷酸二酯鍵；傳代培養過程中，使細胞間分散開來需要用到胰蛋白酶；let-7轉錄的無翻譯功能的miRNA能與RAS mRNA特異性結合，抑制RAS蛋白質的合成；菌落表現型是抗氨芐青霉素但不抗四環素，多數大腸桿菌內導入的是Pbr322Z質粒。

考點：本題考查基因工程、細胞工程的相關知識，意在考查考生能運用所學知識與觀點，通過比較、分析與綜合等方法對某些生物學問題進行解釋、推理，做出合理的判斷或得出正確的結論的能力。