Question

【題目】

（1）①和②過程中所用的限制性內切酶分是 、 。

（2）基因表達載體除了圖示組成外，至少有 等（至少答兩個）。

（3）③過程中用酶切法可鑒定正、反義表達載體。用SmaⅠ酶和NotⅠ酶完全切割正義基因表達載體獲得0．05kb、3．25kb、5．95kb、9．45kb四種長度的DNA片段，則用NotⅠ酶切反義基因表達載體獲得DNA片段的長度應是 和 。

（4）④過程中利用農桿菌介導轉化棉花細胞的過程中，整合到棉花細胞染色體DNA的區段是 ，轉化后的細胞再通過 形成植物體。

（5）導入細胞內的反義GhMnaA2轉錄的mRNA能與細胞內的GhMnaA2轉錄的mRNA互補配對，從而 （促進或抑制）基因的表達，其意義是 。

Answer 1

【答案】（1）HindⅢ、BamHⅠ SmaⅠ

（2）復制原點、終止子、標記基因等

（3）6．0kb 12．7kb

（4）（含有E6啟動子和GhMnaA2基因的）T－DNA 植物組織培養

（5）抑制 阻止β-甘露糖苷酶合成，使棉纖維更長

【解析】

（1）纖維細胞E6啟動子前后含有限制酶HindⅢ和BamHⅠ的切割位點，因此可以用這兩種酶切割；②是構建反義GhMnaA2基因表達載體的過程，反義GhMnaA2基因前后有限制酶SmaⅠ的切割位點，因此可以該酶切割獲取目的基因。

（2）基因表達載體由啟動子、目的基因、復制原點、終止子和標記基因等部分組成。

（3）③過程中，用SmaⅠ酶和NotⅠ酶切正義基因表達載體獲得0．05kb、3．25kb、5．95kb、9．45kb四種長度的DNA片段，則用NotⅠ酶切反義基因表達載體獲得DNA片段的長度應是0．05kb+5．95kb=6．0kb、3．25kb+9．45kb=12．7kb。

（4）農桿菌介導轉化棉花細胞的過程中，整合到棉花細胞染色體DNA的區段是含有E6啟動子和GhMnaA2基因的T-DNA．轉化后，還需依據植物細胞的全能性，采用植物組織培養技術將受體細胞培養形成植物體。

（5）導入細胞內的反義GhMnaA2轉錄的mRNA能與細胞內的GhMnaA2轉錄的mRNA互補配對，從而抑制基因的表達的翻譯過程，進而阻止β-甘露糖苷酶合成，使棉纖維更長。