Question

【題目】賴氨酸缺陷型大腸桿菌（）是指經過誘變處理后，失去產生賴氨酸能力的大腸桿菌。回答下列問題：

（1）培養基的配置。配置4類培養基：完全培養基、基本培養基、補充賴氨酸的基本培養基（）、無氮基本培養基。在培養基配制過程中，______（需要/不需要）保持無菌環境。若需要配制固體無氮培養基，則需在液體無氮培養基中添加______。

（2）菌株的誘變。將野生型大腸桿菌接種在液體完全培養基中培養6h，目的是進行_____。然后將菌液進行誘變處理50min，去除誘變劑后，需將菌株轉入液體無氨基本培養基培養至菌體數量不再上升，目的是耗盡菌體中儲存的______。

（3）菌株的篩選。取上述菌懸液，涂布在固體培養基上，待長出菌落后，一一對應地接種至固體基本培養基和固體培養基上，培養一段時間后，挑取_____的菌落，即為菌株。

（4）菌株的保存。將篩選獲得的株接種于______，4℃下保存。

（5）利用菌株篩選能分泌賴氨酸的益生菌。將菌株與_____培養基混合，制成固體平面培養基，然后將需篩選的益生菌涂布在此平板上，培養一段時間后，選取______的菌落即為所需。

Answer 1

【答案】不需要 瓊脂糖 擴大培養 氨基酸 在基本培養基上不生長（或生長不佳），而培養基上能生長（良好生長）的 固體斜面培養基 固體基本 周圍長有

【解析】

1、在一般培養溫度下呈固體狀態的培養基都稱固體培養基。在液體培養基中加入1.5%~2.0%左右的瓊脂，加熱至100℃溶解，40℃下冷卻并凝固，使其成為固體狀態即為固體培養基。

2、液體培養基，固體培養基的對應詞，是微生物或動植物細胞的液狀培養基。它具有進行通氣培養、振蕩培養的優點。在靜止的條件下，在菌體或培養細胞的周圍，形成透過養分的壁障，養分的攝入受到阻礙。由于在通氣或在振蕩的條件下，可消除這種阻礙以及增加供氧量，所以有利于細胞生長，提高生產量。

3、滅菌處理：要獲得微生物純培養，必須避免雜菌污染，因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養基而言，更是要進行嚴格的滅菌。

（1）在培養基配制過程中，不需要保持無菌環境，要獲得微生物純培養，必須避免雜菌污染，在配制完成后需對培養基進行滅菌處理。在液體培養基中加入瓊脂，加熱至100℃溶解，40℃下冷卻并凝固，使其成為固體狀態即為固體培養基。

（2）將野生型大腸桿菌接種在液體完全培養基中培養6h，由于在通氣或在振蕩的條件下，液體培養可消除養分攝入阻礙以及增加供氧量，所以有利于細胞生長，提高生產量，使菌株得到擴大培養。然后將菌液進行誘變處理50min，去除誘變劑后，需將菌株轉入液體無氨基本培養基培養（即不含氨基酸的培養基)至菌體數量不再上升，目的是使菌體無法從外界攝入氨基酸，從而耗盡菌體中儲存的氨基酸。

（3）取上述菌懸液，涂布在固體培養基上，待長出菌落后，一一對應地接種至固體基本培養基和固體培養基上，培養一段時間后，賴氨酸缺陷型大腸桿菌是指失去產生賴氨酸能力的大腸桿菌，在基本培養基上不生長或生長不佳，而培養基上能生長（良好生長），在固體培養基上挑取以上生長情況的菌落，即為菌株。

（4）斜面培養基用于菌種擴大轉管及菌種保藏，將篩選獲得的株接種于固體斜面培養基，4℃下保存。

（5）將菌株與固體基本培養基混合，制成固體平面培養基，然后將需篩選的益生菌涂布在此平板上，培養一段時間后，由于此種益生菌能夠分泌賴氨酸供給菌株，故選取周圍長有的菌落即為所需的能分泌賴氨酸的益生菌。